Anticorps monoclonal anti-PCK1 (PEPCK-C) pour Western Blot et ELISA - P35558

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de PCK1

• PCK1 (phosphoénolpyruvate carboxykinase 1) est l'isoforme cytosolique de la PEPCK, agissant comme l'enzyme limitante de la gluconéogenèse. Elle catalyse la décarboxylation et la phosphorylation réversibles de l'oxaloacétate en phosphoénolpyruvate, équilibrant les flux cataplérotiques et anaplérotiques du cycle de l'acide citrique. Références associées : PMID:24863970, PMID:26971250, PMID:28216384

• Dans des conditions de faible glucose, PCK1 dirige la conversion cataplérotique de l'oxaloacétate en phosphoénolpyruvate pour la gluconéogenèse ; sous forte concentration de glucose, elle favorise la conversion anaplérotique du phosphoénolpyruvate en oxaloacétate. Références associées : PMID:30193097

• Au-delà de sa fonction métabolique, la phosphorylation sur la Ser-90 par AKT1 transforme PCK1 en une sérine-protéine kinase. Cette activité kinase secondaire déclenche sa translocation vers le réticulum endoplasmique, où elle phosphoryle INSIG1/2 pour libérer les facteurs de transcription SREBP et activer l'expression des gènes lipogéniques. Références associées : PMID:32322062

• PCK1 contribue à l'homéostasie des lymphocytes T CD8+ mémoire en fournissant du phosphoénolpyruvate aux voies du glycogène et des pentoses phosphates (par similitude).

• Au niveau subcellulaire, PCK1 est principalement cytosolique, mais après phosphorylation médiée par AKT, elle se transloque vers le réticulum endoplasmique.

• Les principaux sites d'expression tissulaire comprennent le foie, le rein et les adipocytes, reflétant son rôle central dans le métabolisme du glucose et des lipides.

• Les modifications post-traductionnelles comprennent l'acétylation, l'ubiquitination et la phosphorylation, et structurellement, PCK1 est classée comme une kinase liant le GTP, une lyase et une décarboxylase.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène a été produit contre un peptide synthétique couvrant les acides aminés 523–622 près de l'extrémité C-terminale, à distance du site de phosphorylation Ser-90 ; tenez-en compte lors de la conception d'expériences de détection spécifique de la phosphorylation ou de l'isoforme.
• Pour le Western Blot, validez la détection dans des lysats de foie/rein humains, murins ou de rat, car ces tissus expriment des niveaux élevés de PCK1. L'induction de la gluconéogenèse (par exemple, jeûne/traitement par AMPc) peut améliorer le signal.
• En ELISA, testez l'appariement des anticorps et la compatibilité avec les formats sandwich ; la nature monoclonale garantit une spécificité constante d'un lot à l'autre.
• Étant donné le poids moléculaire prédit de 69 kDa, assurez une résolution de gel et des conditions de transfert adéquates ; les modifications post-traductionnelles peuvent décaler la bande observée.

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