Anticorps monoclonal anti-p70 S6 Kinase 1 pour WB, IF/ICC, ELISA - P23443

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de la p70 S6 Kinase 1

• La kinase 1 de la protéine ribosomique S6 bêta-1 (RPS6KB1), également appelée kinase 1 p70 S6 (p70S6K1), S6K et STK14A, est une sérine/thréonine-protéine kinase codée par le gène RPS6KB1 chez l'humain (GeneID : 6198).
• Elle fonctionne comme un effecteur en aval essentiel de la signalisation mTOR, favorisant la prolifération, la croissance et la progression du cycle cellulaire en réponse aux facteurs de croissance et aux nutriments. Références associées : PMID:11500364 PMID:12801526 PMID:14673156
• Elle régule la synthèse protéique par phosphorylation de EIF4B, RPS6 et EEF2K ; elle renforce également l'initiation de la traduction en ciblant PDCD4 pour sa dégradation et en phosphorylant POLDIP3/SKAR. Références associées : PMID:11500364 PMID:12801526 PMID:14673156 PMID:17053147 PMID:15341740
• Elle se localise principalement dans le cytoplasme et le noyau, mais est également détectée au niveau de la membrane externe des mitochondries, des synapses et des synaptosomes.
• Elle est largement exprimée dans les différents tissus.
• Elle est phosphorylée sur plusieurs sites et acétylée ; elle participe à l'inhibition par rétroaction de mTORC2 en phosphorylant SIN1, mTOR, RICTOR et DEPTOR ; elle inhibe également la protéine pro-apoptotique BAD et régule la signalisation de l'insuline par phosphorylation d'IRS1. Références associées : PMID:15899889 PMID:19720745 PMID:19935711 PMID:22017876 PMID:17936702 PMID:18952604

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène est un peptide synthétique correspondant aux acides aminés 1-100 de la p70 S6 Kinase 1 humaine (NP_003152.1). Ce ciblage de l'extrémité N-terminale peut être utile pour détecter les isoformes de longueur complète ainsi que les isoformes potentiellement tronquées à l'extrémité N-terminale.
• En Western blot (WB), une bande d'environ 59 kDa est attendue dans les échantillons humains, murins et de rat ; les lignées cellulaires ou les tissus présentant une signalisation mTOR active (par exemple, des cellules HeLa ou HEK293 stimulées, ou du tissu hépatique) peuvent servir de contrôles positifs.
• En immunofluorescence (IF/ICC), une coloration cytoplasmique et nucléaire ponctuée peut être observée, avec une éventuelle localisation mitochondriale ou synaptique dans certaines conditions ; les conditions de fixation et de perméabilisation doivent être optimisées.
• Pour l'ELISA, l'anticorps peut être utilisé comme réactif de capture ou de détection dans des dosages sandwich, mais la validation de la paire d'anticorps et la détermination du titre sont recommandées dans la matrice d'échantillon concernée.
• La spécificité de l'anticorps doit être confirmée à l'aide de modèles knockout/knockdown ou par un traitement à la phosphatase afin de vérifier la dépendance à la phosphorylation, la cible étant fortement phosphorylée.

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