Anticorps Polyclonal de Lapin Anti-NPAS2 pour WB, IF/ICC, ELISA - Q99743

Spécifications et Paramètres Principaux du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation de NPAS2

• NPAS2 (Neuronal PAS domain-containing protein 2), également appelé MOP4, bHLHe9 ou PASD4, est un facteur de transcription de type basic-helix-loop-helix-PAS qui constitue un composant central de l'horloge circadienne. Il agit comme un activateur transcriptionnel dans la branche positive de la boucle de rétroaction moléculaire de l'horloge.
• La protéine forme un hétérodimère avec BMAL1 (ou BMAL2) et se lie aux éléments de type boîte E (5'-CACGTG-3') dans les promoteurs des gènes contrôlés par l'horloge, entraînant la transcription rythmique des répresseurs centraux de l'horloge (PER1/2/3, CRY1/2) et des cibles en aval impliquées dans le métabolisme, le sommeil et d'autres processus physiologiques.
• NPAS2 joue un rôle crucial dans le maintien des comportements circadiens dans des conditions normales de lumière/obscurité et d'alimentation, ainsi que dans la synchronisation du comportement alimentaire avec la disponibilité programmée de nourriture. Il contribue également à l'homéostasie du sommeil et à la régulation des comportements de type anxieux via la modulation diurne de l'expression du récepteur GABARA1 dans le cerveau.
• Au-delà de l'horloge centrale, NPAS2 régule la transcription des gènes dans les tissus périphériques tels que le foie, contrôlant des voies métaboliques clés. Il est également impliqué dans la réponse aux dommages à l'ADN en régulant les gènes du cycle cellulaire et de la réparation de l'ADN.
• L'hétérodimère NPAS2-BMAL1 participe à une boucle de rétroaction secondaire en activant les récepteurs nucléaires NR1D1/2 et RORA/B/G, qui à leur tour répriment et activent respectivement la transcription de BMAL1, contribuant ainsi à la robustesse circadienne.
• Au niveau subcellulaire, NPAS2 se localise dans le noyau, ce qui est cohérent avec son rôle de facteur de transcription. Il contient des domaines PAS liant l'hème, et la liaison de l'hème peut influencer son activité.
• Les modifications post-traductionnelles et les interactions protéiques sont essentielles pour déterminer la périodicité circadienne, et les perturbations des rythmes médiés par NPAS2 sont impliquées dans les maladies cardiovasculaires, le cancer, les syndromes métaboliques et le vieillissement.
• La protéine est exprimée de manière ubiquitaire, avec des rôles prépondérants dans le noyau suprachiasmatique (SCN) du cerveau (l'horloge centrale) et dans les oscillateurs périphériques.

Conseils Expérimentaux et Astuces Techniques

• L'immunogène de cet anticorps polyclonal de lapin correspond à une séquence située entre les acides aminés 45 – 240 du NPAS2 humain (NP_002509.2), une région englobant une partie du domaine bHLH N-terminal et le premier domaine PAS. Cette conception peut conférer une réactivité aux formes natives et dénaturées.
• Pour le Western blot, une bande d'environ 92 kDa est attendue. Envisagez d'utiliser des conditions réductrices et des protocoles SDS-PAGE standard. Étant donné que NPAS2 subit un cycle circadien, l'heure de prélèvement des échantillons doit être strictement contrôlée pour capturer l'expression optimale.
• Lors de la réalisation d'immunofluorescence/immunocytochimie, NPAS2 montre généralement une localisation nucléaire. Les méthodes de fixation et de perméabilisation doivent être optimisées pour les cibles nucléaires, et une co-marquage avec un marqueur nucléaire peut confirmer la spécificité.
• Dans les applications ELISA, validez l'anticorps dans le système d'échantillon pertinent et incluez des témoins appropriés pour évaluer le bruit de fond. Les anticorps polyclonaux peuvent présenter une variabilité d'un lot à l'autre, un suivi cohérent des lots est donc recommandé.
• Une réactivité croisée avec le NPAS2 de souris et de rat est rapportée ; cependant, un alignement de séquence de la région immunogène est conseillé pour estimer la réactivité dans d'autres espèces. Pour chaque nouvelle espèce ou application, une validation empirique est essentielle.

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