Anticorps polyclonal anti-NOX2/gp91phox pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P04839

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de NOX2/gp91phox

• La NADPH oxydase 2 (NOX2), également connue sous le nom de gp91phox, est la sous-unité catalytique du complexe NADPH oxydase des phagocytes, une enzyme essentielle de l'immunité innée.
• Elle catalyse le transfert d'électrons du NADPH cytosolique vers l'oxygène moléculaire pour produire l'anion superoxyde, une espèce réactive de l'oxygène indispensable à l'élimination des microbes. Références associées : PMID:15338276 PMID:36241643 PMID:36413210
• Le transfert d'électrons s'effectue via la flavine adénine dinucléotide (FAD) et deux molécules d'hème, aboutissant à une réaction en sphère externe qui génère le superoxyde. Références associées : PMID:38355798
• L'activation implique la liaison dépendante de la phosphorylation de NCF1/p47-phox cytosolique à l'extrémité C-terminale de CYBA/p22-phox, conduisant à l'assemblage du complexe actif au niveau de la membrane plasmique ou de la membrane phagosomale. Références associées : PMID:19028840 PMID:38355798
• Il se localise principalement au niveau de la membrane plasmique et des membranes phagosomales, ce qui lui permet d'exercer un contrôle spatial sur la production d'espèces réactives de l'oxygène.
• Il est exprimé majoritairement dans les neutrophiles, ce qui est cohérent avec son rôle dans la salve oxydative des phagocytes professionnels.
• Les mutations du gène CYBB codant pour NOX2 sont associées à la maladie granulomateuse chronique liée à l'X, une immunodéficience caractérisée par une salve respiratoire altérée et des infections récurrentes.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène correspond à une région cytoplasmique de NOX2 (aa 385–570), ce qui suggère que l'anticorps peut reconnaître à la fois des conformations dénaturées et natives ; évaluez sa pertinence pour le WB et l'immunofluorescence en fonction de votre préparation d'échantillon.
• Pour le WB, le poids moléculaire prédit du précurseur est d'environ 65 kDa ; la glycoprotéine mature peut migrer à environ 91 kDa. Validez la bande observée dans votre lysat spécifique et incluez des contrôles appropriés.
• En IHC-P et en IF/ICC, attendez un marquage membranaire et phagosomale. Une perméabilisation adéquate est nécessaire pour accéder aux épitopes intracellulaires ; optimisez les conditions de fixation et de perméabilisation.
• Pour l'ELISA, un revêtement par peptide ou protéine recombinante peut être utilisé pour capturer l'anticorps. Envisagez d'ajuster le tampon de revêtement, les conditions de blocage et la titration de l'anticorps pour obtenir un rapport signal/bruit optimal.
• La réactivité croisée avec la souris et le rat suggère une conservation de l'épitope ; validez la spécificité chez ces espèces à l'aide de tissus knock-out ou de compétition peptidique.
• Les études fonctionnelles peuvent inclure une stimulation des phagocytes (par exemple avec du PMA) pour observer la translocation ou une détection améliorée ; assurez-vous de disposer de contrôles appropriés pour l'état d'activation.

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