Anticorps polyclonal anti-NOX2/gp91phox pour WB, ELISA - P04839

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de NOX2/gp91phox

• NOX2/gp91phox, également connu sous le nom de CYBB ou NADPH oxydase 2, est la sous-unité catalytique de la chaîne lourde du complexe cytochrome b-245 des phagocytes.
• Sous-unité catalytique médiant le transfert d'électrons du NADPH cytosolique vers l'O2 pour produire l'anion superoxyde, un précurseur des espèces réactives de l'oxygène cruciales pour l'élimination microbienne (PubMed:15338276, PubMed:36241643, PubMed:36413210). Références associées : PMID:15338276 PMID:36241643 PMID:36413210
• Le transfert d'électrons implique la réduction séquentielle du FAD et de deux cofacteurs hème pour réduire l'O2 (PubMed:38355798). Références associées : PMID:38355798
• L'activation nécessite l'assemblage des sous-unités cytosoliques (par exemple, p47-phox/NCF1) avec le cytochrome b-245 lié à la membrane, déclenché par phosphorylation et translocation membranaire (PubMed:19028840, PubMed:38355798). Références associées : PMID:19028840 PMID:38355798
• Localisé principalement au niveau de la membrane plasmique et de la membrane phagocytaire des phagocytes.
• Détecté dans les neutrophiles, où il joue un rôle central dans le burst respiratoire.
• Les mutations du gène CYBB provoquent la granulomatose septique chronique liée à l'X (MGC), caractérisée par une production défectueuse de superoxyde et des infections récurrentes.
• Contient des domaines de liaison au FAD et au NADPH, deux hèmes, et est N-glycosylé ; régulé par phosphorylation et ubiquitination.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène est un peptide synthétique correspondant aux acides aminés 101-200 du NOX2/gp91phox humain ; l'anticorps polyclonal résultant peut reconnaître plusieurs épitopes dans cette région. Il est recommandé de valider la spécificité en utilisant des contrôles positifs (par exemple, lysats de neutrophiles) et négatifs.
• Pour le Western blot, une bande primaire autour de 65 kDa est attendue pour la forme non glycosylée ; des bandes supplémentaires à des poids moléculaires plus élevés peuvent correspondre aux espèces glycosylées (gp91phox). Optimisez les conditions de blocage et de détection en conséquence.
• Il est rapporté que l'anticorps présente une réactivité croisée avec la souris et le rat ; cependant, en raison des variations de séquence, confirmez la réactivité dans votre système modèle spécifique.
• Dans les applications ELISA, envisagez des tests de compétition par peptide pour évaluer la spécificité.
• Étant donné que la cible est une protéine transmembranaire, l'inclusion de détergents doux dans les tampons de lyse peut améliorer la solubilisation.

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