Anticorps Polyclonal Anti-Notch1 pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P46531

Spécifications et Paramètres Principaux du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation de Notch1

• Notch1 (protéine homologue du locus neurogène notch 1) est une protéine transmembranaire de type I à passage unique, également connue sous le nom de protéine notch associée à la translocation TAN-1, codée par le gène NOTCH1 chez l'homme.
• Fonctionne comme récepteur pour les ligands liés à la membrane Jagged-1 (JAG1), Jagged-2 (JAG2) et Delta-1 (DLL1), jouant un rôle central dans la démination du destin cellulaire, la différenciation, la prolifération et l'apoptose.
• Lors de l'activation par un ligand, le domaine intracellulaire de notch (NICD) est libéré et forme un complexe activateur transcriptionnel avec RBPJ/RBPSUH pour réguler les gènes cibles en aval, y compris ceux du locus enhancer of split.
• Impliqué dans de multiples processus de développement : l'angiogenèse (régulant négativement la prolifération et la migration des cellules endothéliales), la maturation thymique des cellules CD4+ et CD8+, la différenciation folliculaire, le développement cérébelleux via DNER, et la détermination de la symétrie gauche/droite par l'équilibre des cils à l'organisateur gauche-droite.
• Réprime la différenciation neuronale et myogénique ; peut potentialiser la fonction de HIF1A en séquestrant HIF1AN ; requis pour l'astrogenèse protectrice médiée par THBS4 après une blessure.
• La localisation subcellulaire comprend la membrane cellulaire, la membrane des endosomes tardifs et le noyau, cohérente avec ses rôles de signalisation et transcriptionnels.
• Exprimé dans la rate fœtale, le tronc cérébral et le poumon ; chez l'adulte, se trouve principalement dans les tissus lymphoïdes.
• Les modifications post-traductionnelles incluent la glycosylation, la formation de ponts disulfures, l'hydroxylation et la phosphorylation ; la protéine est soumise à un traitement protéolytique et à l'ubiquitination.

Guides Expérimentaux et Conseils Techniques

• L'immunogène correspond aux acides aminés 2456-2555 du Notch1 humain (NP_060087.3), situé dans le domaine cytoplasmique. Cette région est conservée chez l'homme, la souris et le rat, ce qui soutient la réactivité croisée signalée.
• Pour le Western blot, un standard de poids moléculaire élevé et un gel de polyacrylamide à faible pourcentage (ex : 6–8 %) sont recommandés en raison de la grande taille de la protéine (273 kDa). Des temps de transfert prolongés peuvent être nécessaires pour un transfert efficace sur la membrane.
• Validez l'anticorps dans un système d'échantillon approprié tel que HeLa, Jurkat ou d'autres lignées cellulaires connues pour exprimer Notch1. Un tissu de contrôle positif comme la rate ou le tronc cérébral peut être approprié pour l'IHC-P.
• Pour l'immunohistochimie (paraffine), une récupération de l'antigène utilisant un tampon citrate médié par la chaleur (pH 6,0) ou un tampon EDTA (pH 9,0) peut être envisagée, bien que les conditions optimales doivent être déterminées expérimentalement.
• En IF/ICC, une perméabilisation au Triton X-100 ou à la saponine est suggérée pour détecter les épitopes intracellulaires, car l'immunogène se trouve dans la queue cytoplasmique.
• Notch1 subit un traitement protéolytique ; plusieurs bandes peuvent être observées en WB. Le précurseur de pleine longueur (~300 kDa) et les formes transmembranaires/cytoplasmiques traitées (~120 kDa et ~110 kDa) peuvent être détectées, selon le type cellulaire et l'état d'activation.

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