Anticorps monoclonal de lapin anti-nNOS pour WB, IF/ICC, IF-P, ELISA - P29475

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la nNOS

• La nNOS (Nitric Oxide Synthase 1) est une enzyme constitutive principalement responsable de la production d'oxyde nitrique (NO) dans les neurones, où le NO agit comme neurotransmetteur et messager rétrograde dans le système nerveux.
• Au-delà de la signalisation neuronale, la nNOS présente une activité peptidyl-cystéine S-nitrosylase, médiant la S-nitrosylation de la cystéine de protéines cibles cytoplasmiques comme la SRR, contribuant ainsi à la régulation post-traductionnelle.
• Codée par le gène NOS1, de multiples isoformes apparaissent par épissage alternatif ; l'isoforme 1 est exprimée de manière ubiquitaire (cerveau, muscle squelettique, testicule, poumon, rein), tandis que l'isoforme 3 est spécifique au testicule et l'isoforme 4 est détectée dans le testicule, le muscle squelettique, le poumon et le rein.
• Au niveau subcellulaire, la nNOS se localise sur la membrane cellulaire, y compris le sarcolemme des cellules musculaires, et sur les épines dendritiques des neurones, ce qui la positionne pour une signalisation précise.
• La protéine est une flavoprotéine contenant de l'hème qui se lie à la calmoduline, au FAD, au FMN, au NADPH et au fer, nécessitant de multiples cofacteurs pour son activité oxydoréductase.
• Les modifications post-traductionnelles incluent la phosphorylation et l'ubiquitination, qui peuvent réguler son activité, sa stabilité ou sa localisation.
• En tant qu'enzyme clé de la signalisation par l'oxyde nitrique, la nNOS est impliquée dans la neurotransmission, la plasticité synaptique et la contractilité musculaire.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond à un peptide C-terminal (aa 1335–1434), une région conservée chez l'humain, la souris et le rat, ce qui est cohérent avec la réactivité croisée rapportée ; envisagez un alignement de séquence si vous l'utilisez chez d'autres espèces.
• Pour le Western blot (WB), le poids moléculaire élevé de la nNOS (~161 kDa) peut nécessiter des temps de transfert prolongés et un pourcentage de gel optimisé ; validez la détection dans des lysats de tissus ou de cellules pertinents.
• Dans les applications d'immunofluorescence (IF), attendez-vous à un marquage au niveau de la membrane cellulaire, du sarcolemme ou des épines dendritiques ; une co-coloration avec des marqueurs spécifiques aux compartiments peut faciliter la localisation.
• Pour l'ELISA, les protocoles standard basés sur des peptides ou des protéines devraient être applicables ; vérifiez la spécificité en utilisant de la nNOS recombinante ou un test de blocage par peptide compétitif si des signaux non spécifiques sont préoccupants.
• En tant qu'anticorps monoclonal de lapin, il offre une grande cohérence d'un lot à l'autre ; néanmoins, chaque nouveau lot doit être titré dans le système de dosage prévu.

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