Anticorps Monoclonal Lapin Anti-NLRP3 pour WB, IP, ELISA - Q96P20

Spécifications et Paramètres Principaux du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation du NLRP3

• Le NLRP3 (protéine contenant les domaines NACHT, LRR et PYD 3), également connu sous le nom de cryopyrine, est un récepteur de reconnaissance de motifs cytosolique qui sert de composant sensoriel de l'inflammasome NLRP3. Références connexes : PMID:16407889, PMID:18403674, PMID:18604214
• Lors de son activation par des pathogènes, des cristaux ou des particules environnementales, le NLRP3 oligomérise et recrute l'ASC et la pro-caspase-1, formant un complexe d'inflammasome qui favorise l'activation de la caspase-1 ; cela conduit au clivage et à la sécrétion des cytokines pro-inflammatoires IL-1β et IL-18, ainsi qu'à la pyroptose médiée par la gasdermine D. Références connexes : PMID:23582325, PMID:28847925, PMID:31189953
• L'inflammasome NLRP3 stimule également la sécrétion non conventionnelle de l'alarmine HMGB1, amplifiant ainsi les réponses inflammatoires. Références connexes : PMID:22801494
• Dans des conditions de repos, le NLRP3 est maintenu dans un état auto-inhibié lié à l'ADP ; divers stimuli qui induisent l'efflux de K+ et la perturbation membranaire déclenchent son activation conformationnelle. Références connexes : PMID:35114687
• Suite à l'activation, le NLRP3 est transporté vers le centre organisateur des microtubules (MTOC), où il est débloqué par NEK7, puis se relocalise vers des vésicules du réseau trans-Golgi dispersé (dTGN) en se liant au phosphatidylinositol 4-phosphate (PtdIns4P), conduisant à l'assemblage de l'inflammasome actif. Références connexes : PMID:36442502, PMID:39173637
• Indépendamment de son rôle dans l'inflammasome, le NLRP3 peut agir comme régulateur de transcription dans les lymphocytes T auxiliaires 2 (Th2), se liant à l'ADN et favorisant l'expression d'IL-4 pour stimuler la différenciation Th2, avec des implications pour l'asthme allergique et la croissance tumorale.
• Au niveau subcellulaire, le NLRP3 se localise dans le cytosol, les mitochondries, le réticulum endoplasmique, l'appareil de Golgi, et peut être sécrété ; il est principalement exprimé dans les macrophages, les cellules dendritiques et les barrières épithéliales, à des niveaux plus faibles dans les monocytes et les ostéoblastes.

Guidance Expérimentale et Conseils Techniques

• L'immunogène correspond aux acides aminés 100–210 près du domaine PYD N-terminal du NLRP3 humain ; tenez compte du fait que l'anticorps peut reconnaître un épitope dans cette région, ce qui peut être pertinent lors de l'évaluation de constructions tronquées ou mutantes.
• Pour le Western blot, validez l'anticorps en utilisant des lysats de macrophages humains ou de cellules mononucléaires du sang périphérique, où l'expression du NLRP3 est connue ; une bande à environ 118 kDa est attendue.
• Dans les expériences d'immunoprécipitation, assurez-vous de conditions de lyse optimisées pour préserver l'intégrité du complexe NLRP3, car la cible interagit avec plusieurs protéines de l'inflammasome.
• Pour les applications ELISA, des titrations en damier préliminaires avec du NLRP3 recombinant ou des lysats cellulaires sont conseillées pour établir les concentrations optimales d'enrobage et de détection.
• Puisque l'activation du NLRP3 peut impliquer des modifications post-traductionnelles (par exemple, ubiquitination, phosphorylation), envisagez de traiter les cellules avec des stimuli appropriés (par exemple, LPS + nigéricine) pour observer des changements dans les motifs de détection.

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