Anticorps monoclonal de lapin anti-NLRP3 pour WB, ELISA - Q96P20

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de NLRP3

• NLRP3 (protéine 3 contenant les domaines NACHT, LRR et PYD), également connue sous le nom de cryopyrine ou CIAS1, est un composant capteur central de l'inflammasome NLRP3, un complexe multiprotéique essentiel à la défense immunitaire innée.
• En réponse à divers signaux associés aux pathogènes et aux dommages cellulaires — notamment l'ATP extracellulaire, la nigericine, les cristaux de monourate de sodium ou la bêta-amyloïde — NLRP3 initie l'assemblage de l'inflammasome en recrutant PYCARD/ASC et la pro-caspase-1, conduisant à l'activation de la caspase-1, à la sécrétion d'IL-1β/IL-18 et à la mort cellulaire par pyroptose. Références associées : PMID:16407889 PMID:18403674 PMID:18604214 PMID:27432880 PMID:23582325 PMID:28847925 PMID:31189953
• L'activation de NLRP3 est rigoureusement contrôlée ; elle nécessite un efflux de K+ et implique un transport médié par la dynéine vers le centre organisateur des microtubules (MTOC), où elle est déverrouillée par NEK7 avant de se relocaliser vers les membranes dispersées du réseau trans-Golgi (dTGN) via une liaison au phosphatidylinositol 4-phosphate pour former l'inflammasome actif. Références associées : PMID:36442502 PMID:39173637 PMID:30487600 PMID:34554188
• Au-delà de son rôle canonique dans l'inflammasome, NLRP3 fonctionne également de manière indépendante dans le noyau en tant que régulateur transcriptionnel, favorisant la différenciation des cellules Th2 en se liant à l'ADN et en stimulant l'expression de l'IL4.
• La protéine se localise dynamiquement dans plusieurs compartiments subcellulaires, notamment le cytosol, les mitochondries, l'appareil de Golgi, le réticulum endoplasmique et le noyau, et peut être sécrétée.
• Principalement exprimée dans les macrophages, NLRP3 est également présente dans les cellules dendritiques, les lymphocytes B et T, ainsi que dans les épithéliums squameux stratifiés et les corpuscules de Hassall du thymus. Références associées : PMID:33231615 PMID:34133077 PMID:11786556 PMID:17164409
• Des modifications post-traductionnelles clés — notamment la phosphorylation, l'ADP-ribosylation, la palmitoylation, la formation de ponts disulfure et l'ubiquitination — régulent finement la stabilité, la localisation et l'activité de NLRP3.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Pour le Western blot, envisagez d'utiliser un gel SDS-PAGE à faible pourcentage (par exemple 8%) et d'optimiser les conditions de transfert pour la NLRP3 de haut poids moléculaire (~118 kDa). Un contrôle positif tel qu'un lysat de macrophages THP-1 stimulés par du LPS peut être bénéfique.
• Cet anticorps monoclonal de lapin est adapté aux formats ELISA standard ; lors de la mise en place de votre test, évaluez les concentrations de revêtement et associez-le à un anticorps de détection approprié dans votre matrice d'échantillon spécifique.
• Étant donné que l'expression de NLRP3 peut être induite dans des conditions inflammatoires, un prétraitement des modèles cellulaires avec des activateurs de NLRP3 (par exemple, LPS plus nigericine) peut améliorer la détection en WB et en ELISA.

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