Anticorps polyclonal anti-NLRC4 pour WB - Q3UP24

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de NLRC4

• NLRC4 (protéine 4 de la famille NLR contenant un domaine CARD) est également connue sous les alias Ipaf, CARD12, CLAN ; c'est un composant clé des inflammasomes qui déclenchent les réponses immunitaires innées contre les pathogènes intracellulaires.
• Cette protéine agit comme un capteur qui assemble le complexe de l'inflammasome NLRC4 après reconnaissance indirecte de composants bactériens et fongiques, entraînant l'activation de la caspase-1, la production de cytokines pro-inflammatoires (par exemple l'IL-1β) et la pyroptose des macrophages.
• NLRC4 fonctionne en coopération avec les protéines de la famille NAIP (NAIP1, NAIP2, NAIP5), qui se lient directement à des ligands spécifiques dérivés de pathogènes comme la flagelline, les protéines de tige du T3SS (par exemple PrgJ) et les protéines de l'aiguille du T3SS, déclenchant ainsi l'assemblage de l'inflammasome NLRC4.
• L'inflammasome NLRC4 est essentiel pour la défense de l'hôte contre les bactéries Gram négatives telles que Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Legionella pneumophila et Pseudomonas aeruginosa, ainsi que contre le pathogène fongique Candida albicans.
• Dans la muqueuse intestinale, NLRC4 distingue les bactéries commensales des bactéries pathogènes, induisant une sécrétion protectrice d'IL-1β spécifiquement en réponse à des pathogènes comme Salmonella ou P. aeruginosa.
• Subcellulairement, NLRC4 est localisée dans le cytosol et peut former des speck d'inflammasome après activation.
• Expression tissulaire : NLRC4 est exprimée par les phagocytes mononucléés intestinaux, ce qui souligne son rôle dans l'immunité muqueuse.
• La protéine possède un domaine C-terminal riche en leucine (LRR), un domaine central de liaison aux nucléotides (NBD/NACHT) avec une activité de liaison à l'ATP, et un domaine CARD N-terminal ; elle est phosphorylée au cours de l'activation de l'inflammasome.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène utilisé pour cet anticorps polyclonal correspond aux acides aminés 71-170 de la NLRC4 de souris. Cette région se situe dans le domaine N-terminal, ce qui peut offrir une réactivité croisée avec les orthologues humain et rat en raison de la conservation de la séquence. Validez la réactivité croisée dans votre dispositif expérimental spécifique.
• Le poids moléculaire prédit de NLRC4 est d'environ 116 kDa. pour le Western blot, prévoyez un gel de pourcentage adapté et des conditions de transfert appropriés, et incluez des contrôles positifs tels que des lignées cellulaires de macrophages (par exemple J774, RAW 264.7) stimulées pour induire l'expression de NLRC4.
• Pour les applications d'immunofluorescence (IF) ou IF-P, NLRC4 est typiquement cytosolique en condition de steady-state mais peut former des speck ponctués d'inflammasome après stimulation. Un co-marquage avec ASC ou la caspase-1 peut aider à visualiser les inflammasomes activés.
• Pour les applications ELISA, cet anticorps peut être utilisé comme réactif de capture ou de détection après validation appropriée du appariement. Réalisez une titration et testez dans vos conditions de dosage.

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