Anticorps monoclonal anti-NFKB1 pour WB, IHC-P, IP, ELISA, CHIP - P19838

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de NF-kB

• NF-κB est un facteur de transcription pléiotropique présent dans presque tous les types cellulaires. Il constitue l'étape finale de cascades de signalisation déclenchées par divers stimuli et régule des processus comme l'inflammation, l'immunité, la différenciation, la croissance cellulaire, la tumorigenèse et l'apoptose.
• NF-κB fonctionne sous forme de complexes homodimères ou hétérodimères formés par des protéines contenant un domaine de type Rel : RELA/p65, RELB, NFKB1/p105, NFKB1/p50, REL et NFKB2/p52. L'hétérodimère p65-p50 est la forme la plus abondante.
• Le gène NFKB1 code pour un précurseur de 105 kDa (p105) qui subit un traitement co-traductionnel médié par le protéasome pour générer la sous-unité active de liaison à l'ADN de 50 kDa (p50). Références associées : PMID:1423592
• La sous-unité p50 s'associe à RELA/p65 pour former l'hétérodimère NF-κB p65-p50, qui se lie au site consensus κB 5′-GGRNNYYCC-3′ dans les régions enhancers des gènes de réponse immunitaire et de réaction de phase aiguë. Références associées : PMID:1740106, PMID:7830764
• Alors que les hétérodimères p65-p50 et RelB-p50 agissent comme activateurs transcriptionnels, l'homodimère p50-p50 fonctionne comme un répresseur, mais peut devenir un activateur après association avec BCL3.
• NFKB1/p105 agit également comme une molécule de rétention cytoplasmique pour les protéines NF-κB associées, maintenant celles-ci inactives dans le cytoplasme ; sa dégradation par le système ubiquitine-protéasome libère la MAP3K8 active pour propager la signalisation MAPK.
• La localisation subcellulaire est dynamique : les complexes NF-κB résident principalement dans le cytoplasme sous forme inactive liée aux inhibiteurs IκB, et se translocalisent dans le noyau après activation.
• Les modifications post-traductionnelles telles que la phosphorylation, l'acétylation, l'hydroxylation et l'ubiquitination régulent l'activité, la stabilité et les interactions de NFKB1.

Conseils expérimentaux et techniques

• Pour le Western blot, le fractionnement nucléaire et cytoplasmique peut aider à distinguer les bandes de p105 (105 kDa) et de p50 (50 kDa) ; validez avec des contrôles de chargement appropriés.
• En IHC-P, envisagez d'optimiser la récupération d'antigène et de valider les profils de coloration avec des contrôles positifs connus (ex : tissus immunitaires) et négatifs.
• Pour CHIP, vérifiez que l'anticorps peut enrichir les régions promotrices contenant des sites κB ; des expériences pilotes avec des loci génomiques positifs (ex : TNFA) et négatifs sont recommandées.
• Étant donné que l'immunogène est un peptide synthétique, la réactivité croisée avec d'autres membres de la famille NF-κB doit être évaluée par extinction par siRNA ou compétition avec le peptide immunisant.

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