Anticorps monoclonal anti-NCF4/p40-phox pour WB, IHC-P, IP, ELISA - Q15080

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de NCF4/p40-phox

• NCF4/p40-phox est une sous-unité du complexe NADPH oxydase phagocytaire qui génère des anions superoxyde en transférant des électrons du NADPH vers l'oxygène moléculaire.
• La protéine contient des domaines SH3 et PX, ce qui la classe comme protéine 4 contenant des domaines SH3 et PX (SH3PXD4) ; elle est également connue sous le nom de facteur 4 de la NADPH oxydase neutrophile.
• L'activation du complexe nécessite l'assemblage des sous-unités cytosoliques, dont NCF4, avec le complexe core lié à la membrane ; ce processus est initié par la liaison dépendante de la phosphorylation de NCF1/p47-phox à CYBA/p22-phox.
• L'expression de NCF4 est restreinte aux cellules hématopoïétiques.
• Subcellulairement, elle se localise dans le cytoplasme et le cytosol, et s'associe aux membranes des endosomes et à la membrane plasmique après activation.
• La protéine est soumise à phosphorylation et à épissage alternatif, et elle est impliquée dans la maladie granulomateuse chronique lorsqu'elle est défectueuse.
• Le poids moléculaire de l'isoforme canonique est d'environ 39 kDa.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène est un peptide synthétique couvrant les acides aminés 240-339, situé dans la région C-terminale de l'NCF4 humain. Cette région inclut une partie du domaine PX et les séquences adjacentes, donc l'anticorps peut reconnaître l'NCF4 pleine longueur et potentiellement des variants d'épissage contenant ce segment.
• Pour le Western blot, une bande proche de 39 kDa est attendue en conditions réductrices ; envisagez d'utiliser des lysats de cellules hématopoïétiques (par ex. HL-60, neutrophiles) comme contrôle positif.
• En immunohistochimie, les coupes incluses en paraffine peuvent nécessiter une récupération d'épitope induite par la chaleur ; la dilution de l'anticorps et les conditions d'incubation doivent être optimisées sur des tissus positifs connus comme la rate ou la moelle osseuse.
• Pour l'immunoprécipitation, le format monoclonal de lapin offre souvent une haute affinité, mais la co-immunoprécipitation des composants du complexe NADPH oxydase peut nécessiter des conditions de lyse douces pour préserver les interactions protéine-protéine.
• En ELISA, l'anticorps obtenu contre l'immunogène peptidique peut être utilisé pour détecter l'NCF4 recombinant ou natif ; l'appariement avec un autre anticorps spécifique d'épitope différent peut permettre le développement d'un ELISA sandwich.

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