Anticorps polyclonal de lapin anti-MST1/STK4 pour WB, IF/ICC, IP, ELISA - Q13043

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de MST1/STK4

• La sérine/thréonine-protéine kinase 4 (STK4), également appelée MST1, KRS2 et YSK3, est une kinase pro-apoptotique activée par le stress, codée par le gène STK4. C'est un composant clé de la voie de signalisation Hippo qui contrôle la taille des organes et supprime les tumeurs en limitant la prolifération et en favorisant l'apoptose.
• MST1/STK4 forme le cœur de la cascade de kinases Hippo avec sa protéine régulatrice SAV1, phosphorylant et activant LATS1/2 en complexe avec MOB1, qui phosphoryle ensuite et inactive les oncoprotéines YAP1 et TAZ.
• Lors du clivage par la caspase au cours de l'apoptose, le fragment de kinase actif se transloque dans le noyau, où il phosphoryle l'histone H2B sur la sérine 14 (H2BS14ph), déclenchant directement la condensation de la chromatine et la fragmentation de l'ADN.
• MST1/STK4 phosphoryle de multiples cibles en aval, notamment FOXO3 (favorisant la translocation nucléaire et la mort cellulaire), FOXO1 (régulant la transcription de PMAIP1), SIRT1 (inhibant la désacétylation de p53 pour renforcer l'apoptose dépendante de p53) et PKB/AKT1 (agissant comme inhibiteur).
• Il phosphoryle également le récepteur aux androgènes (RA) sur la sérine 650, supprimant l'activité du RA en s'opposant à la formation du complexe RA-chromatine et en interagissant avec la signalisation AKT1.
• La localisation subcellulaire est principalement cytoplasmique, mais la kinase active clivée pénètre dans le noyau dans des conditions apoptotiques pour exercer ses fonctions pro-apoptotiques.
• Bien qu'elle soit exprimée de manière ubiquitaire, le niveau de la protéine MST1/STK4 est particulièrement augmenté dans le cancer de la prostate, passant de l'état normal à l'état malin, ce qui suggère un rôle potentiel dans la progression du cancer.
• Les caractéristiques structurales clés comprennent un domaine kinase sérine/thréonine N-terminal et un domaine régulateur C-terminal avec un motif en superenroulement ; les modifications post-traductionnelles incluent l'acétylation et la phosphorylation, et la protéine entière a un poids moléculaire prédit d'environ 56 kDa.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond aux acides aminés 303-487 de la région régulatrice C-terminale de la protéine MST1/STK4 humaine, évitant le domaine kinase N-terminal ; ainsi, les anticorps polyclonaux de lapin obtenus peuvent reconnaître des épitopes conservés entre les espèces présentant une forte homologie dans cette région.
• Pour le Western blot (WB), une bande proche de 56 kDa est attendue ; cependant, en raison du clivage par la caspase au cours de l'apoptose, un fragment actif plus petit d'environ 36 kDa peut également être détecté dans des échantillons apoptotiques — pensez à utiliser des contrôles appropriés (par exemple, des cellules traitées à la staurosporine).
• En immunofluorescence/immunocytochimie (IF/ICC), une localisation cytoplasmique et nucléaire peut être observée selon l'état apoptotique des cellules ; les méthodes de fixation et de perméabilisation doivent être optimisées pour cette cible.
• Pour l'immunoprécipitation (IP), notez que l'anticorps est une préparation polyclonale et peut co-précipiter des partenaires de liaison tels que SAV1 ou MOB1 ; validez dans votre système d'essai avec des contrôles négatifs appropriés.
• Les performances en ELISA peuvent être améliorées en utilisant l'anticorps comme réactif de revêtement ou de détection lorsqu'il est associé à un anticorps monoclonal de capture approprié spécifique de MST1/STK4.
• La réactivité croisée est rapportée pour l'homme, la souris et le rat ; l'alignement de séquence de la région de l'immunogène montre une conservation élevée chez ces espèces, mais pour d'autres espèces, vérifiez l'homologie avant utilisation.

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