Anticorps monoclonal de lapin anti-MSH6 pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P52701

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de MSH6

• La protéine Msh6 de réparation des mésappariements de l’ADN, également connue sous le nom de protéine de liaison aux mésappariements G/T (GTBP) ou p160, est un composant du système de réparation des mésappariements de l’ADN post-réplicatif (MMR).
• Elle forme un hétérodimère avec MSH2 pour constituer le complexe MutS alpha, qui reconnaît les mésappariements d’une seule base et les boucles d’insertion-délétion de dinucléotides (IDL) dans l’ADN, en courbant l’hélice et en protégeant environ 20 paires de bases lors de sa liaison.
• Après reconnaissance du mésappariement, MutS alpha recrute MutL alpha pour former un complexe ternaire, déclenchant les événements de réparation en aval, notamment la discrimination du brin, l’excision et la resynthèse.
• La liaison et l’hydrolyse de l’ATP agissent comme un commutateur moléculaire : l’ADN mésapparié induit l’échange ADP→ATP, convertissant MutS alpha en une pince coulissante qui diffuse le long de l’ADN, un processus essentiel à la réparation des mésappariements.
• Elle est recrutée sur la chromatine en phase G1 et au début de la phase S par l’intermédiaire de son domaine PWWP, qui se lie spécifiquement à l’histone H3 triméthylée sur la Lys36 (H3K36me3), permettant le marquage précoce des origines de réplication.
• Elle se localise dans le noyau et sur les chromosomes ; les mutations de MSH6 sont associées au cancer colorectal héréditaire sans polypose (HNPCC/syndrome de Lynch) et à d’autres variants pathologiques.
• Elle est annotée avec les mots-clés suivants : dommages à l’ADN, réparation de l’ADN, liaison à l’ADN, liaison à l’ATP, liaison aux nucléotides, interaction hôte-virus et épissage alternatif, reflétant ses divers rôles régulateurs.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• Comme l’immunogène est un peptide synthétique provenant de l’extrémité N-terminale, veillez à ce que l’anticorps reconnaisse la protéine native en le validant dans un système exprimant MSH6 pleine longueur, comme des lysats de cellules HeLa ou MCF7 pour la WB.
• Pour l’IHC-P, optimisez la récupération antigénique (par exemple, tampon citrate pH 6,0 ou EDTA pH 9,0) et tenez compte du fait que MSH6 est nucléaire ; évaluez la coloration sur un adénocarcinome colorectal humain ou un tissu amygdalien comme contrôles positifs.
• En IF/ICC, perméabilisez suffisamment les cellules pour permettre l’accès aux antigènes nucléaires et envisagez une co-coloration avec un marqueur nucléaire afin de confirmer la localisation.
• Pour l’ELISA, un anticorps complémentaire dirigé contre un épitope non chevauchant peut être nécessaire ; validez avec la protéine MSH6 recombinante ou au moyen d’essais de compétition avec le peptide.
• MSH6 étant une protéine de grande taille (153 kDa), utilisez des pourcentages de gel appropriés (par exemple, 6 à 8 % de SDS-PAGE) et prolongez les temps de transfert pour la WB.

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