Anticorps monoclonal anti-CD45R/B220 de souris (biotine) pour cytométrie en flux - P06800 / P08575

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de CD45R/B220

• CD45R/B220, codé par Ptprc, est une isoforme de la protéine tyrosine phosphatase C de type récepteur, également connue sous le nom d’antigène commun des leucocytes (L-CA), d’antigène lymphocytaire 5 (Ly-5) ou de T200. Il s’agit d’une glycoprotéine transmembranaire principalement exprimée sur les cellules hématopoïétiques.
• Cette protéine est un régulateur clé de l’activation des lymphocytes T et agit comme une molécule de co-stimulation positive lors de sa liaison à DPP4. Elle contient deux domaines intracellulaires de PTPase en tandem ; le premier possède une activité enzymatique, tandis que le second module la spécificité du substrat.
• Lors de l’engagement du récepteur des lymphocytes T, CD45 recrute et déphosphoryle des molécules de signalisation telles que SKAP1, FYN et LYN, ajustant ainsi finement le seuil d’activation et empêchant l’autoréactivité.
• CD45 interagit avec CLEC10A sur les cellules présentatrices d’antigène au niveau de la synapse immunologique ; cette interaction, observée sur les cellules dendritiques immatures, reconnaît l’antigène Tn porté par CD45 sur les lymphocytes T effecteurs, contribuant ainsi à la tolérance périphérique.
• L’isoforme B220 est produite par épissage alternatif et est principalement exprimée sur les lymphocytes B ainsi que sur certains lymphocytes T activés, servant de marqueur pan-B classique chez la souris.
• Au niveau subcellulaire, CD45 se localise sur la membrane cellulaire, dans les radeaux membranaires et au niveau de la synapse immunologique, où son regroupement et son exclusion des microdomaines de signalisation influencent son activité.
• Les modifications post-traductionnelles comprennent une glycosylation N- et O-liée étendue, qui affecte sa conformation et ses interactions avec les ligands.
• La protéine de souris possède un poids moléculaire prédit d’environ 144 kDa, mais la glycosylation et les variations d’isoformes entraînent l’observation de bandes comprises entre 130 kDa et 144 kDa.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Pour la cytométrie en flux, effectuez une titration de l’anticorps biotinylé afin de déterminer la concentration optimale pour votre population cellulaire spécifique. Incluez des contrôles isotopiques appropriés et veillez à bloquer les récepteurs Fc lorsque cela est nécessaire.
• L’anticorps étant biotinylé, sa détection nécessite un réactif secondaire de streptavidine ou d’avidine conjugué à un fluorophore. Choisissez un conjugué de streptavidine présentant une réactivité croisée minimale avec l’espèce de votre échantillon.
• Validez la spécificité de la coloration sur des lignées cellulaires connues pour être positives et négatives pour CD45R/B220 (par exemple, des splénocytes de souris ou des lignées de lymphocytes B) afin de confirmer les performances.
• Pour les panels multicolores, vérifiez le chevauchement spectral et utilisez des contrôles de compensation marqués avec un seul fluorophore.
• Après validation, l’anticorps peut également être utilisé dans d’autres applications, mais il est principalement optimisé pour la cytométrie en flux.

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