Anticorps monoclonal anti-souris CD4 (APC/Cyanine7) pour cytométrie en flux - P06332

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de CD4

• Le gène Cd4, qui code pour la glycoprotéine de surface des lymphocytes T CD4, produit une protéine membranaire de type I à passage unique avec quatre domaines extracellulaires de type immunoglobuline, une hélice transmembranaire et une courte queue cytoplasmique. La protéine de souris, également connue sous le nom de L3T4 ou Ly-4, partage cette architecture et joue un rôle central dans l'immunité adaptative.
• CD4 agit comme un corécepteur pour les molécules du CMH de classe II. Sur les lymphocytes T auxiliaires, il se lie au même complexe CMH-peptide reconnu par le récepteur des cellules T (TCR), augmentant ainsi l'affinité globale de l'interaction et facilitant l'activation des lymphocytes T.
• Lors de la liaison au CMH, CD4 recrute la kinase de la famille Src, LCK, vers le complexe TCR-CD3. Cela déclenche des cascades de phosphorylation qui conduisent à la production de lymphokines, à la motilité et à l'adhésion des lymphocytes T, et à leur pleine activation.
• CD4 est essentiel au développement des lymphocytes T auxiliaires dans le thymus et à la différenciation des monocytes en macrophages fonctionnels. Il participe également à l'activation et à l'expression de cytokines dans les macrophages, les cellules dendritiques et les cellules NK, souvent de manière indépendante du TCR/LCK.
• Au niveau subcellulaire, CD4 est principalement localisé à la membrane cellulaire, où il s'associe aux radeaux lipidiques et subit des modifications post-traductionnelles telles que la palmitoylation, la glycosylation N-liée et la phosphorylation. Ces modifications régulent sa localisation membranaire et ses fonctions de signalisation.
• Spécificité tissulaire chez la souris : fortement exprimé sur les lymphocytes T auxiliaires, et également présent à des niveaux plus faibles sur les macrophages, les cellules dendritiques et les cellules NK. Son expression est une caractéristique de la lignée des lymphocytes T auxiliaires.
• La protéine appartient à la superfamille des immunoglobulines et contient plusieurs liaisons disulfure, des caractéristiques qui contribuent à sa stabilité structurelle et à sa capacité à interagir avec ses ligands.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Étant donné que l'immunogène est une protéine recombinante, l'anticorps peut reconnaître un épitope linéaire ; tenez-en compte lors de la récupération antigénique ou des transferts Western dénaturants, bien que cet anticorps soit recommandé pour la cytométrie en flux non dénaturante.
• Pour la cytométrie en flux, effectuez un titrage de l'anticorps pour déterminer la concentration optimale pour votre population cellulaire, et incluez des contrôles isotypiques appropriés et des contrôles de compensation monocouleur lors de l'utilisation de la fluorescence APC/Cyanine7.
• Préparez des suspensions de cellules uniques à partir d'organes lymphoïdes (rate, ganglions lymphatiques, thymus) ou de sang périphérique, et bloquez les récepteurs Fc pour minimiser la liaison non spécifique avant la coloration.
• Validez l'expression dans la souche de souris et le tissu concernés ; notez que CD4 est fortement exprimé sur les lymphocytes T auxiliaires mais peut également être détecté sur des sous-populations de macrophages, de cellules dendritiques et de cellules NK.

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