Anticorps monoclonal de lapin anti-MLKL pour WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - Q8NB16

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de MLKL

• MLKL est une pseudokinase dépourvue d'activité kinase intrinsèque, fonctionnant comme un exécuteur critique de la mort cellulaire nécroptotique induite par le TNF. Références associées : PMID:22265413, PMID:22265414, PMID:22421439

• Suite à sa phosphorylation par RIPK3, MLKL subit une homotrimérisation et se transloque vers la membrane plasmique, où elle déclenche un influx calcique et la rupture de la membrane plasmique, caractéristiques marquantes de la nécroptose. Références associées : PMID:22265413, PMID:22265414, PMID:22421439

• En plus de la nécroptose cytoplasmique, MLKL peut également promouvoir la nécroptose nucléaire lors d'une infection par orthomyxovirus. ZBP1 détecte l'ARN-Z viral et active RIPK3 dans le noyau, conduisant à la phosphorylation de MLKL, à la perturbation de l'enveloppe nucléaire et à la fuite cytosolique d'ADN (Par similarité).

• La liaison de MLKL à l'inositolhexakisphosphate (InsP6) est essentielle à sa fonction nécroptotique, reliant la signalisation des phosphoinositides à l'exécution de la mort cellulaire. Références associées : PMID:29883610

• Au niveau subcellulaire, MLKL réside principalement dans le cytoplasme mais se déplace vers la membrane cellulaire et le noyau lors de son activation, ce qui correspond à ses doubles rôles dans la perturbation de la membrane et de l'enveloppe nucléaire.

• La protéine contient un domaine en coiled-coil N-terminal et un domaine pseudokinase C-terminal, et est soumise à un épissage alternatif, produisant des isoformes qui peuvent réguler la nécroptose ou avoir des fonctions inconnues.

• Les modifications post-traductionnelles, en particulier la phosphorylation médiée par RIPK3, sont critiques pour l'activation de MLKL, son oligomérisation et son adressage membranaire ; d'autres modifications et interactions peuvent affiner son activité.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène utilisé couvre les acides aminés 369-471 au sein du domaine pseudokinase C-terminal du MLKL humain (NP_689862.1). Cette région est susceptible de reconnaître à la fois la protéine pleine longueur et toute isoforme contenant ce segment ; confirmez la spécificité dans votre système modèle par des contrôles ARNi ou knockout.

• Pour le Western blot, une bande d'environ 54 kDa est attendue pour le MLKL humain. La dilution optimale doit être déterminée empiriquement en utilisant des lysats cellulaires induits à la nécroptose (par exemple, traitement par TNF-alpha + mimétique de Smac + z-VAD-fmk) comme contrôles positifs.

• Les applications IF/ICC et IHC-P peuvent nécessiter une récupération antigénique et une perméabilisation optimisées pour votre type d'échantillon. Les stimuli nécroptotiques peuvent enrichir MLKL au niveau de la membrane plasmique, fournissant un contrôle de localisation dynamique.

• Des protocoles ELISA peuvent être développés en utilisant la protéine MLKL recombinante ou des lysats cellulaires ; envisagez des paires d'anticorps pour ELISA sandwich pour améliorer la sensibilité.

• Une réactivité croisée est rapportée contre l'humain et la souris ; cependant, une validation dans l'espèce et le tissu concernés est recommandée avant des études à grande échelle.

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