Anticorps monoclonal anti-MITF pour WB, IHC-P, ELISA - O75030

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du MITF

• Le MITF (facteur de transcription associé à la microphtalmie) est un membre de la famille des facteurs de transcription à doigt de leucine hélice-boucle-hélice basique (bHLH-Zip), codé par le gène MITF (également désigné BHLHE32).
• Il agit comme régulateur principal de la survie des mélanocytes, de la différenciation et de la biogenèse des mélanosomes en se liant aux séquences d'ADN boîte M (5'-TCATGTG-3') et boîte E (5'-CACGTG-3') présentes dans les promoteurs de gènes de pigmentation comme TYR et TYRP1 (PubMed:10587587, PubMed:22647378, PubMed:27889061). Références associées : PMID:10587587 PMID:22647378 PMID:27889061
• Il participe à la réponse cellulaire à la disponibilité en acides aminés via la voie de signalisation MTOR : dans des conditions riches en nutriments, MTOR phosphoryle le MITF, ce qui entraîne son inactivation ; inversement, le jeûne ou un stress lysosomal inhibe MTOR, favorisant la déphosphorylation du MITF et son activation transcriptionnelle (PubMed:36608670). Références associées : PMID:36608670
• Il se localise majoritairement dans le noyau, mais est également détecté dans le cytoplasme et sur les membranes des lysosomes, ce qui reflète ses rôles transcriptionnels et de signalisation.
• Il est exprimé dans les mélanocytes, l'épithélium pigmentaire rétinien, le cerveau, le placenta et le rein ; son expression dans les mélanocytes est essentielle pour la pigmentation et les pathologies associées.
• Plusieurs isoformes produites par épissage alternatif affectent la distribution tissulaire et la spécificité fonctionnelle ; des mutations du gène MITF sont associées au syndrome de Waardenburg type 2A, au syndrome de Tietz et au syndrome COMMAD.
• Il est fortement régulé par des modifications post-traductionnelles incluant la phosphorylation et l'ubiquitination, qui modulent sa stabilité, son affinité de liaison à l'ADN et son activité transcriptionnelle.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond aux acides aminés 402-526 du MITF humain (NP_001341533.1), une région qui comprend le motif de dimérisation à doigt de leucine ; il est recommandé de vérifier la réactivité aux isoformes et l'accessibilité de l'épitope dans votre système expérimental.
• Pour le Western blot (WB), le MITF a un poids moléculaire prédit d'environ 59 kDa, mais plusieurs isoformes et modifications post-traductionnelles peuvent produire des bandes supplémentaires ; validez en utilisant des contrôles positifs appropriés (par exemple, lignées de mélanome pigmenté) et des contrôles de chargement.
• Pour l'immunohistochimie (IHC-P), les conditions de récupération d'antigène et la dilution de l'anticorps doivent être déterminées empiriquement ; des tissus pigmentés comme la peau ou le mélanome uvéal peuvent servir de contrôles positifs.
• Pour l'ELISA, des titrages en échiquier préliminaires sont recommandés pour déterminer les conditions optimales de revêtement et de détection ; l'association avec des anticorps de capture validés peut améliorer la sensibilité.
• Le MITF étant un facteur de transcription peu abondant, l'enrichissement de l'échantillon ou des méthodes de détection à haute sensibilité peuvent être nécessaires pour une détection fiable dans certains types d'échantillons.

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