Anticorps polyclonal de lapin anti-mésothéline pour WB, ELISA - Q13421

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la mésothéline

• La mésothéline est codée par le gène MSLN et produite sous forme de protéine précurseur qui est clivée en deux produits : le facteur potentialisateur des mégacaryocytes (MPF) et la mésothéline mature liée à la membrane.
• La mésothéline ancrée à la membrane pourrait jouer un rôle dans l'adhésion cellulaire, potentiellement impliquée dans les interactions cellule-cellule ou cellule-matrice.
• Le facteur potentialisateur des mégacaryocytes (MPF) agit comme une cytokine qui peut potentialiser la formation de colonies de mégacaryocytes in vitro, ce qui suggère un rôle dans l'hématopoïèse.
• La protéine se localise sur la membrane cellulaire via une ancre GPI, et on la trouve également dans l'appareil de Golgi et sous formes sécrétées après clivage et libération.
• La mésothéline est exprimée dans les cellules mésothéliales qui tapissent la plèvre, le péritoine et le péricarde ; à des niveaux plus faibles dans le poumon, le cœur, le placenta et le rein.
• Elle est fortement sur-exprimée dans les mésothéliomes, les cancers de l'ovaire et certains carcinomes épidermoïdes, ce qui en fait un marqueur tumoral et une cible thérapeutique utile.
• Les modifications post-traductionnelles incluent la formation de ponts disulfures, la glycosylation N-liée et l'attachement d'une ancre GPI, qui sont essentiels pour sa stabilité et son association à la membrane.
• Des événements d'épissage alternatif, de phosphorylation et de clivage protéolytique régulent ses multiples formes fonctionnelles et ses distributions subcellulaires.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond au domaine extracellulaire (aa 296–606) de la mésothéline humaine, qui est conservé chez la souris (d'après la réactivité croisée), ce qui le rend adapté à la détection d'échantillons humains et murins en WB et ELISA.
• Pour le Western blot, gardez à l'esprit que le précurseur pleine longueur (~ 69 kDa) est clivé, donc plusieurs bandes peuvent être observées selon l'échantillon (par exemple ~ 40 kDa pour la mésothéline mature et ~ 31 kDa pour le MPF). Validez avec la protéine recombinante ou des lysats de lignées cellulaires à forte expression (par exemple, des lignées de cancer de l'ovaire comme OVCAR-3 ou des lignées de mésothéliome).
• En ELISA, l'anticorps peut être utilisé comme réactif de capture ou de détection ; la concentration optimale de revêtement et l'appariement avec un anticorps de détection doivent être déterminés empiriquement, idéalement en utilisant la mésothéline recombinante comme standard.
• En tant qu'anticorps polyclonal, une variabilité d'un lot à l'autre peut survenir ; réalisez toujours un test pilote avec des contrôles positifs et négatifs pour confirmer la réactivité et la spécificité.
• Notez que le MPF soluble endogène dans le sérum ou les surnageants de culture cellulaire peut être détecté ; ajustez les conditions de blocage et de lavage en conséquence pour réduire le bruit de fond.

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