Anticorps polyclonal anti-Mésothéline pour WB, IF-P, IHC-P, ELISA - Q13421

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la Mésothéline

• La mésothéline, également appelée antigène CAK1 ou facteur potentialisateur pré-pro-mégacaryocytaire, est codée par le gène MSLN et existe sous plusieurs isoformes issues de l'épissage alternatif.
• La protéine est synthétisée sous forme de précurseur qui est clivé en une mésothéline mature ancrée à la membrane liée au GPI et en un facteur potentialisateur de mégacaryocytes (MPF) sécrété.
• La mésothéline ancrée à la membrane est supposée jouer un rôle dans l'adhésion cellulaire, médiant potentiellement les interactions entre les cellules mésothéliales et d'autres types cellulaires.
• Le MPF, fragment sécrété, a été initialement identifié pour sa capacité à potentialiser la formation de colonies de mégacaryocytes in vitro.
• Au niveau sous-cellulaire, la mésothéline se localise à la membrane cellulaire grâce à son ancre GPI, ainsi qu'à l'appareil de Golgi pendant la biosynthèse ; le fragment MPF est sécrété vers l'extérieur cellulaire.
• L'expression tissulaire est la plus marquée dans les poumons et les cellules mésothéliales, avec des niveaux plus faibles dans le cœur, le placenta et les reins ; au niveau protéique, elle est fortement sur-exprimée dans les mésothéliomes, les cancers de l'ovaire et certains carcinomes épidermoïdes.
• Les modifications post-traductionnelles clés comprennent la glycosylation N-liée, la formation de ponts disulfures, la phosphorylation et l'attachement de l'ancre GPI, qui contribuent tous à ses propriétés structurelles et fonctionnelles.
• Les mots-clés UniProt soulignent son implication dans l'adhésion cellulaire, son association à la membrane et sa pertinence dans la pathologie via une expression anormale dans les cancers.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène a été conçu contre les acides aminés 296–606 de la Mésothéline humaine, couvrant le domaine extracellulaire ; cette région peut être partiellement partagée avec le fragment MPF, permettant potentiellement la détection des deux formes.
• Pour le Western blotting, une bande d'environ 69 kDa est attendue pour le précurseur complet ou la forme ancrée à la membrane ; des bandes supplémentaires d'environ 30 à 40 kDa peuvent correspondre au fragment MPF détaché.
• Lors de la réalisation d'IHC-P, envisagez un démasquage antigénique à pH 6 ou 9 et validez la spécificité du coloration en utilisant des coupes de tissus de mésothéliome ou de cancer de l'ovaire connus pour exprimer un niveau élevé de Mésothéline.
• Pour l'IF-P, fixez les cellules avec du paraformaldéhyde et perméabilisez-les de manière appropriée ; confirmez la localisation du signal à la membrane cellulaire et à l'appareil de Golgi.
• Validez la réactivité avec des échantillons humains, de souris et de rat en utilisant des lignées cellulaires positives et négatives connues ; par exemple, OVCAR-3 (cancer de l'ovaire humain) ou AB22 (mésothéliome de souris) comme contrôles positifs.
• Les applications ELISA peuvent bénéficier du test des formats de capture et de détection avec la protéine recombinante de Mésothéline/MPF comme étalon.
• À noter que l'anticorps peut détecter à la fois les formes membranaires et solubles ; envisagez une préparation d'échantillon adaptée (lysat cellulaire vs milieu conditionné) pour les distinguer.

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