Anticorps polyclonal de lapin anti-MDC1 pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q14676

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de MDC1

• MDC1 (Médiateur de la protéine 1 du point de contrôle des dommages à l'ADN), également connu sous le nom de NFBD1 (Facteur nucléaire à domaines BRCT 1), agit comme un lecteur d'histones qui se lie spécifiquement à l'histone H2AX phosphorylée (γH2AX) au niveau des sites de cassures double-brin de l'ADN, servant d'échafaudage moléculaire pour les protéines de réparation de l'ADN et de transduction du signal. Références associées : PMID:12475977 PMID:12499369 PMID:12551934
• Après un dommage à l'ADN, MDC1 facilite le recrutement et la rétention de facteurs de réparation de l'ADN, y compris le complexe MRN (via NBN) et TOPBP1, aux foyers de dommages ; il est essentiel pour la phosphorylation et l'activation ultérieures des kinases de point de contrôle ATM, CHEK1 et CHEK2, conduisant à l'arrêt du cycle cellulaire et à la stabilisation de p53. Références associées : PMID:12607004 PMID:12607005 PMID:15201865 PMID:16049003
• MDC1 contribue à la stabilité chromosomique pendant la mitose en favorisant la formation de filaments TOPBP1 qui retiennent les chromosomes cassés, et il est nécessaire pour la réparation par recombinaison homologue en permettant le recrutement de NBN aux cassures double-brin de l'ADN. Références associées : PMID:18411307 PMID:18582474 PMID:18583988 PMID:30898438
• La protéine se localise principalement dans le noyau et s'associe à la chromatine, en particulier au niveau des foyers induits par les dommages. Elle est fortement exprimée dans les testicules, ce qui suggère un rôle dans les processus méiotiques ou des cellules germinales.
• MDC1 est une grande phosphoprotéine (~227 kDa) qui subit de multiples modifications post-traductionnelles, notamment l'acétylation, la méthylation et l'ubiquitination, qui régulent son interaction avec le mécanisme de réparation de l'ADN.
• L'épissage alternatif génère plusieurs isoformes, et la protéine contient des domaines BRCT en tandem qui médient sa liaison aux protéines phosphorylées au niveau des sites de dommages.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond à la région N-terminale (aa 1-350) de la MDC1 humaine ; cette région est située en dehors des domaines BRCT, et l'anticorps peut reconnaître la forme entière et les fragments N-terminaux.
• Pour le Western blot (WB), en raison du poids moléculaire élevé (~227 kDa), il est recommandé d'utiliser des gels SDS-PAGE à faible pourcentage (par exemple, gel de séparation 6-8 %) et un temps de transfert suffisant.
• Pour l'immunohistochimie (IHC-P) et l'immunofluorescence (IF/ICC), validez les profils de coloration sur des tissus positifs connus (par exemple, les testicules) ou des modèles cellulaires induits par des dommages à l'ADN.
• L'anticorps a été rapporté pour l'ELISA, mais les dilutions de travail optimales doivent être déterminées empiriquement par l'utilisateur final.

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