Anticorps polyclonal de lapin anti-MCM5 pour WB, IF/ICC, IP, ELISA - P33992

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de MCM5

• MCM5 (CDC46/P1-CDC46) est le facteur de licence de réplication de l'ADN et un composant central du complexe MCM2-7, l'hélicase réplicative eucaryote essentielle pour l'initiation et l'élongation de la réplication de l'ADN une fois par cycle cellulaire. Références associées : PMID:40940420

• Avec CDC45 et GINS, MCM5 forme l'hélicase CDC45-MCM-GINS (CMG) qui déroule l'ADN duplex aux fourches de réplication, servant de plateforme centrale pour l'assemblage du réplisome. Références associées : PMID:16899510, PMID:32453425, PMID:34694004

• L'anneau MCM2-7 contient six sites actifs d'ATPase formés aux interfaces des sous-unités ; MCM5 contribue un motif conservé de doigt arginine à la poche de liaison à l'ATP de la sous-unité voisine, avec des contributions différentielles à l'activité hélicase. Références associées : PMID:32453425

• MCM5 se localise dans le noyau et est lié à la chromatine de manière dépendante du cycle cellulaire, jouant un rôle critique dans le licenciement de la réplication et la progression de la phase S.

• Les modifications post-traductionnelles, y compris l'acétylation, la phosphorylation et la conjugaison de type ubiquitine, régulent la stabilité et l'activité de MCM5.

• MCM5 est essentiel pour la stabilité du génome ; des mutations dans le gène MCM5 sont associées au syndrome de Meier-Gorlin 8 (MGORS8) et à d'autres troubles du développement.

• MCM5 est un membre de la famille des hélicases dépendantes de l'ATP MCM, partageant des domaines conservés avec MCM2-7, et est fortement exprimé dans les cellules proliférantes.

• La protéine a un poids moléculaire prédit d'environ 82 kDa et contient des motifs de liaison aux nucléotides critiques pour sa fonction enzymatique.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène (protéine recombinante couvrant les acides aminés 1–230 de MCM5 humain) cible la région N-terminale, qui contient des motifs conservés ; une réactivité croisée avec les orthologues de souris et de rat a été observée. Pour les espèces non listées, vérifier l'homologie de séquence avant utilisation.
• Pour le Western blot (WB), envisager une dilution de départ de 1:500–1:2000 et utiliser des lysats nucléaires ou de cellules entières provenant de cellules proliférantes, où MCM5 est abondant. La bande prédite est d'environ 82 kDa ; noter que la phosphorylation peut provoquer de légers décalages de mobilité.
• En immunofluorescence/immunocytochimie (IF/ICC), MCM5 présente une coloration nucléaire dépendante du cycle cellulaire ; optimiser les conditions de fixation et de perméabilisation pour préserver la protéine liée à la chromatine.
• Pour l'immunoprécipitation (IP), l'anticorps peut enrichir MCM5 natif et son complexe MCM associé ; valider la co-IP d'autres sous-unités MCM pour confirmer l'intégrité du complexe.

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