Anticorps polyclonal de lapin anti-MAPK1/MAPK3 pour WB, IF/ICC, ELISA - P28482 / P27361

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de MAPK1/MAPK3

• MAPK1 (ERK2, p42-MAPK) et MAPK3 (ERK1, p44-MAPK) sont les deux kinases typiques activées par les mitogènes (MAPK) qui constituent le cœur de la cascade de signalisation conservée MAPK/ERK.
• Lorsqu’elles sont activées, MAPK1/3 phosphorylent un large éventail de substrats nucléaires et cytoplasmiques, notamment des facteurs de transcription (par ex. ELK1, FOS), des protéines du cytosquelette et d’autres kinases, afin de réguler la croissance, la prolifération, la différenciation, l’adhésion et la survie cellulaires.
• MAPK1 phosphoryle spécifiquement GLI1 en réponse à la signalisation de Smoothened, favorisant la dissociation de GLI1 de SUFU et sa translocation nucléaire, ce qui régule positivement la voie Hedgehog. Références associées : PMID:35831023
• Dans des conditions hypoxiques, MAPK1 phosphoryle la phosphoglycérate kinase PGK1, la dirigeant vers les mitochondries et supprimant la production d’acétyl-coenzyme A à partir du pyruvate. Références associées : PMID:26942675
• La kinase fait la navette entre le cytoplasme et le noyau, et se localise au niveau des adhérences focales, des cavéoles, du cytosquelette (notamment les centrosomes et les fuseaux), ainsi que des structures associées à la membrane, selon le contexte cellulaire.
• L’activité kinase de MAPK1 est étroitement régulée par des événements de phosphorylation et de déphosphorylation ; elle sert de plateforme pour la propagation des signaux et phosphoryle elle-même des kinases en aval telles que RSK, MSK, MNK et les kinases MAPKAP.
• Les modifications post-traductionnelles comprennent la phosphorylation activatrice des résidus Thr et Tyr dans la boucle d’activation, l’acétylation et l’ubiquitination, qui modulent sa stabilité, sa localisation et ses partenaires d’interaction.
• L’invalidation ou l’expression et la signalisation aberrantes de MAPK1/3 sont impliquées dans le cancer, les troubles neurologiques et d’autres maladies ; la kinase est ciblée par des interactions hôte-virus.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• Cet anticorps polyclonal de lapin a été produit contre un peptide synthétique correspondant aux acides aminés 200 à 300 de MAPK1 et MAPK3 humaines (ERK2 et ERK1) ; il devrait reconnaître les deux kinases et peut détecter plusieurs bandes en Western blot en raison de la présence d’isoformes et de formes phosphorylées.
• Pour le Western blot, charger 20 à 30 µg de lysat protéique total et utiliser des contrôles appropriés (par ex. des cellules privées de sérum comparées à des cellules stimulées par un facteur de croissance) afin d’observer l’activation d’ERK. Les poids moléculaires attendus se situent entre 36 et 43 kDa.
• Pour l’immunofluorescence/ICC, fixer les cellules avec du paraformaldéhyde à 4 % et perméabiliser avec du Triton X-100 à 0,1 % ; une incubation de l’anticorps primaire pendant une nuit à 4 °C est recommandée. Valider la spécificité de la coloration par un blocage peptidique ou une inhibition par siRNA.
• Pour l’ELISA, cet anticorps polyclonal peut être utilisé comme réactif de capture ou de détection ; les conditions optimales de revêtement et de détection doivent être déterminées empiriquement. Une paire d’anticorps monoclonaux appariés peut améliorer la sensibilité et la spécificité.
• L’anticorps présente une réactivité croisée avec MAPK1/MAPK3 de souris et de rat ; toutefois, effectuer une validation spécifique à l’espèce dans votre système expérimental afin de confirmer la réactivité et le rapport signal/bruit.

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