Anticorps Polyclonal de Lapin Anti-MAD2/MAD2L1 pour WB, ELISA - Q13257

Spécifications et Paramètres Essentiels du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation de la Protéine du Point de Contrôle de l'Assemblage du Fuseau Mitotique MAD2A

• MAD2L1 (MAD2A) est un composant crucial du complexe de point de contrôle mitotique (MCC), qui inhibe le complexe promoteur de l'anaphase/cyclosome (APC/C) pour retarder la ségrégation des chromosomes jusqu'à ce que tous les chromosomes soient correctement attachés au fuseau mitotique.
  Références associées :
  PMID:10700282
  PMID:11804586
  PMID:15024386
• Le MCC est composé de CDC20, MAD2L1, BUB1B/BUBR1 et BUB3 ; sa liaison à l'APC/C maintient le complexe dans un état inactif, empêchant le déclenchement prématuré de l'anaphase.
  Références associées :
  PMID:15020684
  PMID:27509861
• Lors de la levée du point de contrôle de l'assemblage du fuseau, le complexe MCC-APC/C recrute l'enzyme E2 UBCH10, conduisant à l'auto-ubiquitination et à la dégradation de CDC20. Cela réactive l'APC/C, entraînant la transition métaphase/anaphase.
  Références associées :
  PMID:27509861
• MAD2L1 adopte deux conformations distinctes : ouverte (O-MAD2) et fermée (C-MAD2). La forme fermée s'assemble avec MAD1L1 au niveau des kinétochores non attachés pour créer un modèle qui catalyse la conversion de l'O-MAD2 en C-MAD2, amplifiant ainsi le signal du point de contrôle.
  Références associées :
  PMID:29162720
• L'épissage alternatif produit deux isoformes (MAD2A et MAD2B) ; MAD2A (codée par MAD2L1) est l'isoforme régulée mitotiquement, essentielle à la fonction du point de contrôle du fuseau.
• La protéine se localise de manière dynamique tout au long du cycle cellulaire : elle réside dans le cytoplasme et le noyau pendant l'interphase, se concentre au niveau des kinétochores et des pôles du fuseau pendant la mitose, et se relocalise lors de l'activation du point de contrôle.
• Les modifications post-traductionnelles, notamment l'acétylation et la phosphorylation, régulent finement l'activité et les interactions de MAD2L1. Son poids moléculaire calculé par UniProt est d'environ 23,5 kDa, tandis que les données du produit indiquent ~24 kDa.

Guide Expérimental et Conseils Techniques

• L'immunogène (aa 1-205) englobe la région N-terminale critique pour l'interaction avec MAD1 et le changement conformationnel. Cette conception peut permettre la détection des deux formes O-MAD2 et C-MAD2.
• Pour le Western blot, prévoir un bande proche de 24 kDa. Utiliser des cellules synchronisées en mitose (par exemple, traitées au nocodazole) conjointement avec des témoins en interphase pour confirmer la spécificité.
• Les applications ELISA peuvent utiliser des formats directs ou sandwich ; envisager d'utiliser la protéine recombinante MAD2L1 comme standard.
• L'anticorps est prédit pour réagir de manière croisée avec MAD2L1 de souris et de rat sur la base de la conservation de la séquence ; une validation dans des lysats de tissus ou de cellules appropriés est recommandée.
• Pour les études fonctionnelles, combiner avec des protocoles de synchronisation cellulaire pour enrichir les populations mitotiques et améliorer la détection du signal.

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