Anticorps polyclonal de lapin anti-LRRK2 pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q5S007

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de LRRK2

• LRRK2 est une sérine/thréonine-protéine kinase multimodulaire de grande taille qui phosphoryle un large éventail de substrats, jouant un rôle essentiel dans la plasticité neuronale, l'immunité innée, l'autophagie et le trafic vésiculaire. Références associées : PMID:17114044 PMID:20949042 PMID:21850687

• Il agit comme régulateur clé des GTPases RAB, contrôlant leur échange GTP/GDP et leurs interactions protéiques par phosphorylation de multiples RAB, notamment RAB3A-D, RAB5A-C, RAB8A/B, RAB10, RAB12, RAB29, RAB35 et RAB43. Références associées : PMID:23395371 PMID:26824392 PMID:28720718 PMID:29125462

• LRRK2 régule la ciliogenèse primaire et la signalisation Sonic Hedgehog (SHH) dans le cerveau via la phosphorylation de RAB8A et RAB10, et, associé à RAB29, assure le trafic rétrograde dépendant du rétrotranseur entre les lysosomes et l'appareil de Golgi. Références associées : PMID:23395371 PMID:29125462 PMID:30398148

• Au-delà de son activité kinase, LRRK2 possède une activité GTPase via son domaine Roc qui régule réciproquement son activité kinase. Il est recruté par RAB29 sur les lysosomes surchargés pour favoriser la libération du contenu lysosomal et empêcher leur élargissement via les effecteurs EHBP1/EHBP1L1. Références associées : PMID:18230735 PMID:26824392 PMID:28720718 PMID:30209220 PMID:38227290

• LRRK2 régule positivement l'autophagie via une voie CaMKK/AMPK dépendante du calcium, impliquant l'activation du récepteur NAADP, l'augmentation du pH lysosomal et la libération de calcium. Références associées : PMID:22012985

• Il module l'immunité innée en renforçant l'activation de RIPK2 en aval de NOD1/NOD2, et indépendamment de son activité kinase, inhibe la dégradation protéasomale de MAPT (tau), favorisant son oligomérisation et sa sécrétion. Références associées : PMID:27830463 PMID:26014385

• LRRK2 se localise dans de nombreux compartiments sous-cellulaires : vésicules cytoplasmiques, appareil de Golgi, réticulum endoplasmique, mitochondries, endosomes, lysosomes et vésicules synaptiques ; il est largement exprimé dans le cerveau, le cœur, le foie et d'autres tissus.

Conseils expérimentaux et techniques

• L'immunogène correspond aux acides aminés 750–910 du LRRK2 humain, une région N-terminale du domaine riche en leucine répétées ; l'anticorps polyclonal obtenu peut reconnaître plusieurs épitopes et est susceptible de convenir à la détection de divers isoformes ou produits de clivage.
• Pour le Western blot, tenez compte du poids moléculaire élevé de LRRK2 (~286 kDa) ; utilisez un gel de polyacrylamide à faible pourcentage (par exemple 6 à 8 %) et optimisez les conditions de transfert (par exemple transfert humide prolongé) pour garantir une efficacité de transfert optimale.
• En immunohistochimie (IHC-P), les méthodes de récupération d'antigène (par activation thermique ou enzymatique) peuvent améliorer la détection ; validez l'anticorps pour votre tissu et vos conditions de fixation spécifiques.
• En immunofluorescence/immunocytochimie (IF/ICC), une perméabilisation et une fixation adaptée peuvent être nécessaires pour préserver l'accessibilité de l'épitope ; un co-marquage avec des marqueurs d'organelles peut aider à confirmer les profils de localisation.
• ELISA : l'anticorps peut être utilisé comme réactif de capture ou de détection ; envisagez de l'associer à un clone d'anticorps anti-LRRK2 validé pour le développement d'un ELISA sandwich.

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