Anticorps polyclonal anti-LRRK2 pour WB, IHC-P, ELISA - Q5S007

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de LRRK2

• LRRK2 (protéine kinase 2 à répétitions riches en leucine, sérine/thréonine), également connue sous le nom de Dardarin, est une grande protéine multidomaine contenant un domaine kinase, un domaine GTPase Roc, un domaine COR et des répétitions WD40. Elle présente à la fois des activités de kinase sérine/thréonine et de GTPase. Références associées : PMID:18230735
• LRRK2 phosphoryle un large éventail de protéines, notamment les GTPases RAB (RAB3A/B/C/D, RAB5A/B/C, RAB8A/B, RAB10, RAB12, RAB29, RAB35, RAB43), PRDX3, APP et RIPK2, régulant ainsi la plasticité neuronale, l’autophagie, l’immunité innée et le transport vésiculaire. Références associées : PMID:23395371, PMID:26824392, PMID:28720718, PMID:21850687, PMID:27830463
• Elle agit comme un régulateur clé de la ciliogenèse primaire en phosphorylant RAB8A et RAB10, favorisant ainsi la signalisation Sonic Hedgehog (SHH) dans le cerveau. Références associées : PMID:29125462, PMID:30398148
• LRRK2 régule positivement l’autophagie par l’activation dépendante du calcium de la voie de signalisation CaMKK/AMPK, impliquant la libération de calcium lysosomal. Références associées : PMID:22012985
• Les mutations de LRRK2 sont associées à la maladie de Parkinson familiale et sporadique, ce qui en fait une cible clé pour la recherche sur la neurodégénérescence.
• Au niveau subcellulaire, LRRK2 se localise dans les vésicules cytoplasmiques, l’appareil de Golgi, les endosomes, les lysosomes, les mitochondries, les vésicules synaptiques, les phagosomes et le cytosquelette ; elle est également présente dans les corps cellulaires neuronaux, les axones et les dendrites.
• Spécificité tissulaire : fortement exprimée dans le cerveau, en particulier dans les neurones pyramidaux du cortex visuel, de la substance noire pars compacta et du noyau caudé-putamen ; également exprimée dans le cœur, le foie, le placenta, les poumons, les muscles squelettiques, les reins et le pancréas (au niveau protéique). Références associées : PMID:29127255
• LRRK2 participe à la voie de transport rétrograde des lysosomes vers l’appareil de Golgi, en interagissant avec RAB29 et le complexe rétromère afin de recycler des protéines telles que M6PR. Références associées : PMID:23395371
• Après son recrutement par RAB29 vers les lysosomes surchargés, LRRK2 phosphoryle et stabilise RAB8A et RAB10, favorisant la libération du contenu lysosomal et régulant la morphologie des lysosomes via EHBP1 et EHBP1L1. Références associées : PMID:30209220, PMID:38227290

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• Pour le Western blot, envisagez d’utiliser un gel SDS-PAGE à 6-8 % et des temps de transfert prolongés en raison du poids moléculaire élevé de LRRK2 (~286 kDa).
• Validez la spécificité de l’anticorps à l’aide de lysats cellulaires ou de tissus issus de cellules avec LRRK2 invalidée ou diminuée, en particulier dans des modèles de cerveau ou de cellules immunitaires.
• Pour l’IHC-P, optimisez la récupération antigénique et la dilution de l’anticorps en utilisant des coupes de cerveau humain ou de rongeur connues pour exprimer LRRK2, telles que celles de la substance noire ou du cortex.
• Pour l’ELISA, utilisez des fragments recombinants de LRRK2 ou des lysats cellulaires comme antigènes de capture, et envisagez un blocage avec de la BSA ou de la caséine afin de réduire le bruit de fond.
• Comme il s’agit d’un anticorps polyclonal, soyez attentif à la variabilité potentielle entre les lots ; validez chaque nouveau lot afin de garantir sa cohérence dans votre application.

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