Anticorps polyclonal de lapin anti-KLKB1 pour WB, IHC-P, ELISA - P03952

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du KLKB1

• Le gène KLKB1 code la prékallikréine plasmatique, le zymogène de la kallikréine plasmatique, une sérine protéase qui circule dans le sang sous forme de précurseur inactif.
• Lors de l'activation, la kallikréine plasmatique participe à l'activation dépendante de la surface de la coagulation sanguine en activant réciproquement le facteur XII de la coagulation (FXII) après s'être liée à des surfaces chargées négativement.
• Elle libère le peptide vasoactif bradykinine à partir de la kininogène de haut poids moléculaire (HMWK), reliant le système d'activation par contact à l'inflammation et à la perméabilité vasculaire.
• La kallikréine plasmatique peut également contribuer au système rénine-angiotensine en convertissant la pro-rénine en rénine active.
• La localisation subcellulaire est exclusivement extracellulaire ; la protéine est sécrétée dans le plasma, où elle se trouve normalement.
• La protéine contient un peptide signal, plusieurs domaines Apple pour les interactions protéine-protéine et un domaine de sérine protéase de type trypsine ; elle est N-glycosylée et stabilisée par des ponts disulfure.
• Les variantes génétiques du gène KLKB1 sont associées au déficit en prékallikréine (trait de Fletcher), une affection rare caractérisée par un temps de céphaline activé prolongé mais généralement sans tendance hémorragique.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène couvre les acides aminés 20 à 300 de la chaîne lourde, qui contient les quatre domaines Apple responsables de la liaison à la HMWK et aux surfaces chargées négativement ; cette région est hautement conservée chez l'homme, la souris et le rat, ce qui explique la réactivité croisée observée.
• Pour le Western blot, une bande proche de 71 kDa (prékallikréine) ou d'environ 85 kDa (forme entière avec glycosylation) peut être détectée ; une réduction avec du DTT/TCEP est recommandée pour résoudre les chaînes liées par des ponts disulfure.
• En immunohistochimie (IHC-P), envisagez une récupération d'antigène avec un tampon citrate (pH 6,0) et un système de détection sensible pour les anticorps primaires de lapin ; l'utilisation de sérum pré-immun ou de contrôles avec peptide bloquant est conseillée pour confirmer la spécificité.
• Pour les ELISA, l'anticorps peut être utilisé comme réagent de capture ou de détection ; cependant, le couplage avec un anticorps monoclonal dirigé contre un épitope distinct peut améliorer la sensibilité et la spécificité.
• Comme la kallikréine plasmatique est abondante dans le sang, la pré-adsorption de l'anticorps polyclonal sur des protéines sériques de souris/rat immobilisées peut réduire le bruit de fond dans les applications sur tissus de rongeurs si une liaison non spécifique est observée.
• Validez les performances sur votre type d'échantillon spécifique (plasma, sérum, lysat tissulaire) en incluant des témoins positifs (par exemple, kallikréine plasmatique purifiée ou plasma activé) et des témoins négatifs (plasma appauvri en KLKB1 ou lignées cellulaires knock-out si disponibles).

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