Anticorps monoclonal anti-KIR2DL2/KIR2DL3 pour WB, IF/ICC, FC, ELISA - P43628

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de KIR2DL2/KIR2DL3

• KIR2DL3 (récepteur immunoglobulinique de type cellule tueuse 2DL3, également connu sous le nom de CD158b, récepteur NK p58, NKAT2) est un membre de la famille KIR, glycoprotéine transmembranaire de type I. Il fonctionne comme un récepteur inhibiteur sur les cellules natural killer (NK) pour des allotypes spécifiques HLA-C, notamment HLA-Cw1, Cw3 et Cw7.
• Le récepteur contient deux domaines extracellulaires de type immunoglobuline C2, une seule hélice transmembranaire et une queue cytoplasmique avec des motifs inhibiteurs basés sur la tyrosine des récepteurs immunologiques (ITIM) qui recrutent des phosphatases pour bloquer les signaux d'activation.
• L'expression de KIR2DL3 est largement restreinte aux cellules NK, où elle médie l'auto-tolérance et assure la surveillance du « soi manquant » en contrôlant l'expression du CMH de classe I sur les cellules cibles.
• L'engagement de KIR2DL3 par son ligand supprime la cytotoxicité médiée par les cellules NK, empêchant la lyse des cellules saines tout en permettant la destruction des cellules qui ont réduit l'expression de HLA-C.
• Le domaine extracellulaire subit une glycosylation N-liée et la formation de ponts disulfures, contribuant aux multiples formes de poids moléculaire observées (~27 kDa non glycosylé et ~37–38 kDa glycosylé).
• KIR2DL2, codé par un gène distinct, partage environ 96 % d'identité des acides aminés avec KIR2DL3 et présente une spécificité HLA‑C similaire ; l'immunogène de l'anticorps (aa 22‑245 de KIR2DL3) couvre une région conservée entre les deux récepteurs, permettant une détection croisée.
• L'épissage alternatif du transcrit KIR2DL3 peut produire des variantes ayant des propriétés de liaison au ligand ou de signalisation altérées, bien que l'isoforme de pleine longueur soit la forme fonctionnelle prédominante.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Pour le Western blot, attendez des bandes autour de 27 kDa (forme non glycosylée) et de 37–38 kDa (forme glycosylée). Utilisez des conditions réductrices et chargez des lysats totaux de lignées cellulaires NK KIR-positives (par exemple, NK92, YTS) comme témoins positifs. Envisagez une déglycosylation avec PNGase F pour simplifier le profil des bandes.
• Comme l'immunogène couvre le domaine extracellulaire, l'anticorps reconnaît le récepteur de surface natif ; pour la cytométrie en flux et l'immunofluorescence, aucune perméabilisation n'est nécessaire pour le marquage de surface. Titrez l'anticorps et incluez un témoin isotypique pour assurer la spécificité sur les PBMC humains ou les cellules NK isolées.
• Pour les applications ELISA, cet anticorps monoclonal peut servir de réactif de capture ou de détection ; si vous construisez un dosage immuno-enzymatique en sandwich, associez-le à une molécule de liaison dirigée contre un épitope distinct. Validez avec la protéine recombinante KIR2DL3 ou des lysats cellulaires.
• Confirmez la réactivité croisée avec KIR2DL2 en testant sur des lignées cellulaires exprimant chaque récepteur individuellement (par exemple, des transfectants 293T), compte tenu de la forte homologie de séquence.
• En raison du polymorphisme des KIR, les profils de marquage peuvent varier entre les donneurs ; optimisez la concentration d'anticorps pour chaque application et type de cellule.

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