PolymAb® de lapin anti-Ki67 (validé KO) pour WB, IF/ICC, IF-P, IHC-P, ELISA - E9PVX6

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de Ki67

• MKI67 (Ki-67) est un marqueur de prolifération bien établi, exprimé dans le noyau des cellules en division active, dont le niveau d'expression est étroitement corrélé au cycle cellulaire.
• Il s'associe aux chromosomes mitotiques au cours de la mitose précoce, formant une structure caractéristique en forme de brosse qui agit comme une barrière stérique et électrostatique pour empêcher l'agrégation des chromosomes. Références associées : PMID:27362226
• La charge nette élevée de Ki67 contribue à ses propriétés de type surfactant, qui dispersent les chromosomes et facilitent leur motilité indépendante. Références associées : PMID:27362226
• En anaphase, Ki67 change de rôle pour devenir un attracteur chromosomique, favorisant l'agrégation des chromosomes par déphosphorylation et séparation de phase liquide-liquide dépendante de l'ARN.
• Il se lie à l'ADN, en particulier aux séquences superenroulées et riches en AT, et interagit avec les ARN ribosomiques précoces pour moduler l'organisation chromosomique.
• Ki67 se localise à la surface des chromosomes, au nucléole et au noyau. Les modifications post-traductionnelles comprennent l'acétylation et la phosphorylation.
• La masse moléculaire prédite de la protéine est d'environ 350 kDa, et l'épissage alternatif donne naissance à des variants de 359 kDa.

Conseils expérimentaux et techniques

• L'immunogène est un peptide synthétique issu des acides aminés 2271 à 2370 ; il est recommandé d'inclure des lysats cellulaires KO positifs et négatifs pour la validation en WB.
• Pour le WB, utilisez un gel à faible pourcentage (par exemple 6 à 8%) et prolongez le temps de transfert en raison de la grande taille de la protéine (~350 kDa).
• En IHC-P, la coloration nucléaire de Ki67 nécessite une récupération d'antigène efficace ; un tampon citrate (pH 6,0) chauffé est couramment utilisé.
• Pour l'IF/ICC, une étape de perméabilisation avec 0,1 à 0,5 % de Triton X-100 est recommandée pour accéder aux antigènes nucléaires.
• Cet anticorps est validé pour les études sur knock-out ; vérifiez sa spécificité dans votre système modèle en comparant les échantillons de type sauvage et les échantillons KO.

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