Anticorps polyclonal anti-KAP1/TRIM28 pour WB, IP, IF/ICC, IHC-P, ELISA - Q13263

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de KAP1/TRIM28

• Également connue sous les noms de facteur intermédiaire de transcription 1-bêta (TIF1-beta), protéine 1 associée à KRAB (KAP-1) ou KRIP-1, cette protéine de 88,6 kDa de la famille des motifs tripartites (TRIM) possède des régions RING, B-box, coiled-coil, PHD et bromodomaine.
• Agit comme une ligase E3 de SUMO et de l'ubiquitine qui sert d'échafaudage aux complexes de répression transcriptionnelle en recrutant SETDB1 (histone méthyltransférase) et le complexe NuRD (remodelage et désacétylation des nucléosomes), ce qui entraîne la méthylation de H3K9 et la formation d'hétérochromatine.
• Agit comme corépresseur nucléaire des protéines à doigts de zinc contenant un domaine KRAB (KRAB-ZFP), en assurant la répression des rétrovirus endogènes et de gènes essentiels au développement embryonnaire et à l'empreinte génomique.
• Dans les lymphocytes T régulateurs, coopère avec l'isoforme 2 de ZFP90 pour renforcer l'activité de répresseur transcriptionnel de FOXP3, essentielle à la fonction suppressive des Treg. Références associées : PMID:23543754
• Maintient un état transcriptionnel répressif dans les cellules souches embryonnaires (ESC) indifférenciées, préservant la pluripotence et le potentiel développemental précoce. Références associées : PMID:24623306
• Agit comme régulateur positif de la signalisation de l'interféron de type I (IFN-I) en assurant l'ubiquitination liée à Lys-63 de TBK1, facilitant ainsi la formation du complexe TBK1-IRF3. Références associées : PMID:38495890
• Régule l'immunité innée et l'inflammation par la SUMOylation de médiateurs clés : la SUMOylation de TRAF6 contrôle la navette nucléo-cytoplasmique et l'activation de NF-kappa-B, tandis que la SUMOylation de NLRP3 stabilise l'inflammasome et renforce son activation. Références associées : PMID:39920527, PMID:34373456
• Se localise principalement dans le noyau et est largement exprimée dans les tissus humains, notamment la rate, le thymus, la prostate, les testicules, les ovaires, l'intestin grêle, le côlon et les leucocytes du sang périphérique.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène couvre la région C-terminale (aa 576-835) contenant le PHD et le bromodomaine ; l'anticorps polyclonal obtenu peut reconnaître KAP1/TRIM28 de pleine longueur ainsi que d'éventuels variants d'épissage ou formes modifiées post-traductionnellement.
• Pour le Western blot, une bande autour de 89 kDa (88,6 kDa théoriques) est attendue ; il est recommandé d'utiliser une SDS-PAGE à 8–10 % pour une résolution optimale et de valider le produit dans des lysats de cellules humaines, murines ou de rat.
• Pour les essais d'immunoprécipitation, optimiser la concentration d'anticorps et les conditions du tampon de lyse ; la réticulation de l'anticorps sur les billes peut améliorer la capture et réduire les interférences liées aux chaînes lourdes et légères.
• Pour l'immunofluorescence/ICC, un marquage nucléaire est attendu ; utiliser une fixation appropriée (par ex. PFA à 4 %) et une perméabilisation (par ex. Triton X-100 à 0,1 %) et inclure une contre-coloration au DAPI.
• Lors de la réalisation d'une immunohistochimie (IHC-P), la récupération antigénique dans un tampon citrate (pH 6,0) est souvent bénéfique ; toujours inclure des tissus témoins positifs et négatifs afin de confirmer la spécificité.
• Pour les applications ELISA, en association avec un anticorps de détection, déterminer empiriquement la concentration optimale de l'antigène de revêtement et les dilutions d'anticorps à l'aide d'échantillons positifs et négatifs connus.

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