Anticorps monoclonal anti-IRE1 pour WB, ELISA - O75460

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'IRE1

• IRE1 (également connu sous le nom d'IRE1P, IRE1a ou hIRE1p) est une sérine/thréonine-protéine kinase et endoribonucléase d'environ ~110 kDa codée par le gène ERN1 chez l'homme.
• IRE1 sert de capteur critique dans la réponse aux protéines mal repliées (UPR) du réticulum endoplasmique (RE). Dans des conditions basales, son domaine luminal est maintenu inactif par liaison à HSPA5/BiP. L'accumulation de protéines mal repliées déclenche la libération, l'homodimérisation, l'autophosphorylation et l'activation de son domaine endoribonucléase. Références associées : PMID:11175748, PMID:11779464, PMID:12637535, PMID:21317875
• Le domaine endoribonucléase activé clive spécifiquement 26 nucléotides de l'ARNm XBP1, générant un transcrit épissé qui code un facteur de transcription puissant entraînant l'expression des gènes cibles de l'UPR. Références associées : PMID:11779464, PMID:21317875, PMID:24508390
• IRE1 est une protéine transmembranaire résidente du RE, avec ses domaines kinase et RNase orientés vers le cytoplasme. Elle fonctionne comme un signal proximal pour les voies de trafic non conventionnelles médiées par le stress du RE, telles que la livraison de CFTR à la membrane plasmique via la modulation de GORASP2 et SEC16A. Références associées : PMID:21884936, PMID:28067262
• La protéine subit de multiples modifications post-traductionnelles, notamment la phosphorylation, l'ADP-ribosylation et la glycosylation, et abrite des motifs fonctionnels clés : un domaine kinase de liaison à l'ATP, un capteur luminal stabilisé par un pont disulfure et un site actif endoribonucléase dépendant des métaux.
• IRE1 est exprimée de manière ubiquitaire dans les tissus humains, avec des niveaux particulièrement élevés dans le pancréas, ce qui est cohérent avec son rôle central dans la protéostasie du RE.
• Les isoformes issus d'épissages alternatifs et les polymorphismes d'ERN1 peuvent affiner l'intensité de la signalisation UPR et contribuer aux décisions du destin cellulaire entre adaptation et apoptose.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène utilisé pour cet anticorps est une protéine de fusion recombinante couvrant les acides aminés 286–435 de l'IRE1 humain (NP_001424.3), qui se situe dans les régions juxtamembranaires et du domaine kinase. Cette région est conservée chez l'homme, la souris et le rat, ce qui soutient la réactivité croisée signalée.
• Pour les applications de Western blot, envisagez d'utiliser des inducteurs de stress du RE (par exemple, la tunicamycine, la thapsigargine) pour améliorer la détection de l'IRE1, et validez l'anticorps dans le système d'échantillon pertinent avec des contrôles de chargement appropriés.
• En ELISA, optimisez les conditions de revêtement et de détection car l'anticorps reconnaît un épitope linéaire au sein de la séquence de l'immunogène.
• Le poids moléculaire prédit est d'environ ~110 kDa, mais les modifications post-traductionnelles et la phosphorylation induite par l'activation peuvent entraîner de légers décalages de mobilité ; confirmez avec des marqueurs de poids moléculaire.

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