Anticorps polyclonal anti-IRAK1 pour WB, IF/ICC, ELISA - P51617

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation d'IRAK1

• IRAK1 (kinase 1 associée au récepteur de l'interleukine-1) est une sérine/thréonine kinase essentielle à l'initiation des réponses immunitaires innées, agissant comme un médiateur clé des voies de signalisation des récepteurs Toll-like (TLR) et du récepteur de l'IL-1.
• Lors de l'activation des TLR/IL-1R, IRAK1 est rapidement recrutée par MYD88, phosphorylée par IRAK4 et subit une autophosphorylation, ce qui déclenche les événements de signalisation en aval.
• IRAK1 phosphoryle les ubiquitine-ligases E3 Pellino (PELI1, PELI2, PELI3), favorisant la polyubiquitination d'IRAK1 elle-même, ce qui entraîne le recrutement du complexe IKK et la translocation nucléaire ultérieure de NF-kB.
• Elle phosphoryle également TIRAP afin de favoriser son ubiquitination et sa dégradation, et phosphoryle directement IRF7 pour induire la production d'interféron de type I, établissant ainsi un état antiviral.
• La localisation subcellulaire comprend le cytoplasme, le noyau et les gouttelettes lipidiques ; la sumoylation d'IRAK1 facilite sa translocation nucléaire, où elle phosphoryle STAT3.
• Deux isoformes principales existent : l'isoforme 1 est plus fortement exprimée que l'isoforme 2, toutes deux étant présentes de manière ubiquitaire dans les tissus humains.
• IRAK1 intervient dans les interactions hôte-virus et subit diverses modifications post-traductionnelles, notamment la phosphorylation, l'ubiquitination et la sumoylation.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène correspond aux acides aminés 424-633 d'IRAK1 humain, une région conservée chez l'humain, la souris et le rat, ce qui explique la réactivité croisée observée.
• Pour le Western blot, il est recommandé d'utiliser des lysats cellulaires totaux provenant de cellules immunitaires stimulées par les TLR/IL-1R (par exemple, THP-1, RAW264.7) afin de détecter les bandes dépendantes de l'activation autour de 77 kDa ; l'expression basale peut varier.
• Dans les expériences d'IF/ICC, optimisez les conditions de fixation et de perméabilisation ; l'IRAK1 endogène peut se localiser à la fois dans le cytoplasme et dans le noyau selon le type cellulaire et la stimulation.
• Pour l'ELISA, l'association avec un anticorps de détection apparié (par exemple, ciblant un épitope différent) peut améliorer la sensibilité ; validez la méthode dans la matrice d'échantillon pertinente.
• En tant qu'anticorps polyclonal, une variabilité d'un lot à l'autre est possible ; incluez des contrôles positifs (par exemple, des cellules stimulées) et négatifs dans chaque test.

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