Anticorps polyclonal anti-Parkin humain pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - O60260

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de Parkin

• Parkin, codée par le gène PRKN (PARK2), est une E3 ubiquitine-protéine ligase qui fonctionne au sein d'un complexe multiprotéique pour catalyser l'attachement covalent de molécules d'ubiquitine sur des protéines substrats, médiant des processus cellulaires incluant la dégradation protéique, le contrôle qualité mitochondrial et la survie cellulaire. Références associées : PMID:10888878, PMID:10973942, PMID:11431533

• Parkin ubiquitine un large éventail de substrats, notamment SYT11, VDAC1, BCL2, CCNE1, GPR37, RHOT1/MIRO1, MFN1, MFN2, SNCAIP, TOMM20 et ZNF746 ; elle peut médier la monoubiquitination ainsi que divers liaisons de chaînes polyubiquitine (Lys-6, Lys-11, Lys-48, Lys-63) selon le contexte cellulaire. Références associées : PMID:29311685, PMID:32047033, PMID:10888878, PMID:10973942, PMID:11431533, PMID:19229105, PMID:20889974, PMID:25474007

• Une fonction clé de Parkin est de maintenir l'intégrité mitochondriale ; lors d'un dommage mitochondrial, la phosphorylation médiée par PINK1 recrute Parkin vers la membrane mitochondriale externe, où elle ubiquitine les protéines pour promouvoir la mitophagie et la fission mitochondriale, éliminant ainsi les organelles dysfonctionnelles. Références associées : PMID:11439185, PMID:18957282, PMID:19029340, PMID:24660806, PMID:24784582, PMID:25474007

• Parkin ubiquitine directement les protéines de la membrane externe mitochondriale telles que TOMM20, MFN1, MFN2, MIRO1 et USP30, déclenchant la mitophagie et empêchant la fusion des mitochondries endommagées avec les réseaux sains ; elle régule également la motilité mitochondriale via la dégradation de MIRO1. Références associées : PMID:19029340, PMID:19966284, PMID:21753002, PMID:22396657, PMID:23620051

• Au-delà de la mitophagie, Parkin protège les cellules de l'apoptose en monoubiquitinant BCL2 pour promouvoir l'autophagie, en limitant l'influx calcique mitochondrial et en réprimant transcriptionnellement p53 ; elle peut également fonctionner comme suppresseur de tumeur. Références associées : PMID:20889974, PMID:19801972, PMID:32047033, PMID:12719539, PMID:11439185

• Les mutations homozygotes ou hétérozygotes composites de PRKN sont une cause majeure de la maladie de Parkinson juvénile autosomique récessive (PDJ) ; Parkin est fortement exprimée dans le cerveau, en particulier dans la substance noire, et ses niveaux sont réduits dans le cerveau des patients PARK2 et dans de nombreuses tumeurs. Références associées : PMID:9560156, PMID:12719539, PMID:14614460, PMID:19501131

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène couvre les 387 acides aminés N-terminaux de la Parkin humaine, ce qui suggère que l'anticorps peut reconnaître de multiples épitopes et détecter la Parkin endogène ainsi que la protéine recombinante.
• Pour le Western blot, une bande d'environ 52 kDa est attendue ; cependant, des bandes mineures peuvent apparaître en raison de modifications post-traductionnelles ou d'isoformes, et il est recommandé d'inclure des contrôles appropriés (par exemple, des lysats de knock-out de Parkin).
• Compte tenu de la réactivité croisée avec la souris et le rat, cet anticorps peut convenir à l'étude de Parkin dans des modèles rongeurs de la maladie de Parkinson ; pensez à valider l'anticorps dans votre système tissulaire ou cellulaire spécifique par IHC-P ou IF/ICC, avec une co-coloration pour les marqueurs mitochondriaux.
• Les dilutions de travail et les conditions optimales doivent être déterminées empiriquement pour chaque application ; des dilutions initiales de 1:500-1:2000 pour WB, 1:50-1:200 pour IHC-P et 1:50-1:200 pour IF/ICC sont couramment utilisées pour les anticorps polyclonaux.
• Pour ELISA, l'anticorps peut être utilisé comme anticorps de capture ou de détection lorsqu'il est associé à un anticorps secondaire approprié ; les performances peuvent varier selon la présentation de l'antigène.

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