Anticorps monoclonal anti-humain CD59 conjugué pour la cytométrie en flux - P13987

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du CD59

• Le CD59, également connu sous le nom de protectine, protéine inhibitrice du complexe d'attaque membranaire (MAC-IP), facteur de restriction homologue de 20 kDa (HRF-20) et antigène 1F5, est une glycoprotéine de surface cellulaire ancrée par GPI qui fonctionne comme un inhibiteur critique du complexe d'attaque membranaire (MAC) du complément.
• Il se lie au composant C8 (C8A et C8B) du MAC en assemblage, formant un feuillet bêta intermoléculaire qui empêche l'incorporation de multiples molécules de C9, bloquant ainsi la formation du pore osmotique et protégeant les cellules humaines de la lyse médiée par le complément (PubMed:11882685, PubMed:1698710, PubMed:2475111, PubMed:36797260). Références associées : PMID:11882685, PMID:1698710, PMID:2475111, PMID:36797260
• Une forme soluble du CD59, trouvée dans l'urine, conserve l'activité de liaison au complément mais présente une capacité grandement réduite à inhiber l'assemblage du MAC sur les membranes cellulaires.
• La protéine est localisée à la membrane cellulaire via un ancrage GPI ; une forme sécrétée a également été détectée.
• Le CD59 subit un épissage alternatif et des modifications post-traductionnelles incluant la formation de ponts disulfure, la glycation et la glycosylation N-liée ; des mutations du CD59 sont associées à l'anémie hémolytique héréditaire.
• La masse moléculaire prédite du CD59 est de 14177 Da, ce qui est cohérent avec sa migration observée à ~14–18 kDa sur SDS-PAGE.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène englobe le domaine extracellulaire (aa 26–101) du CD59 humain, qui inclut les sites fonctionnels clés pour la liaison au MAC ; cette conception peut favoriser la reconnaissance des conformations natives et correctement repliées.
• Pour la cytométrie en flux, envisagez d'utiliser des cellules vivantes non fixées pour préserver le CD59 ancré par GPI à la surface cellulaire ; un blocage des récepteurs Fc est recommandé pour minimiser la liaison non spécifique.
• Titrez l'anticorps dans vos conditions expérimentales spécifiques pour déterminer la dilution optimale ; protégez le conjugué de la lumière et évitez les cycles répétés de congélation-décongélation pour maintenir la stabilité du fluorophore.
• Validez la spécificité en utilisant des cellules positives pour le CD59 (par ex., leucocytes) et des contrôles CD59-knockout ou déficients ; une détection complémentaire avec un marqueur d'ancrage GPI peut confirmer la localisation membranaire.

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