Anticorps monoclonal anti-CD59 humain pour cytométrie en flux (FC) - P13987

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du CD59

• Le CD59, également appelé protectine, protéine inhibitrice du MAC (MAC-IP) et facteur de restriction homologue de 20 kDa (HRF20), est une glycoprotéine ancrée par GPI qui agit comme un régulateur essentiel du complément.
• Il fonctionne comme un inhibiteur puissant du complexe d'attaque membranaire (MAC) en se liant aux composants C8 et C9, empêchant la formation du pore cytolytique. Références associées : PMID:11882685 PMID:1698710 PMID:2475111 PMID:36797260
• Le CD59 est largement exprimé sur les cellules humaines, ancré à la membrane plasmique via un groupement glycosylphosphatidylinositol (GPI), et protège les cellules hôtes de la lyse médiée par le complément autologue.
• Une forme soluble, présente dans l'urine, conserve la capacité de liaison au complément mais présente une activité inhibitrice du MAC fortement réduite par rapport à l'isoforme liée à la membrane.
• La protéine subit des modifications post-traductionnelles incluant la formation de ponts disulfure, la glycation et la glycosylation N-liée ; des mutations sont associées à l'anémie hémolytique héréditaire.
• L'épissage alternatif génère plusieurs variants de transcrits, et la protéine a été identifiée par séquençage protéique direct et par protéomique à grande échelle.
• Au niveau sous-cellulaire, le CD59 se localise sur la membrane cellulaire et est également sécrété, contribuant à l'échappement immunitaire et à la signalisation au-delà de l'inhibition du complément.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène couvre les acides aminés 26 à 101 du CD59 humain, ce qui correspond au domaine extracellulaire mature ; l'anticorps est censé reconnaître le CD59 natif lié à la membrane. Il est recommandé d'utiliser un contrôle d'isotype adapté pour les expériences de cytométrie en flux.
• Pour la cytométrie en flux, titrez l'anticorps conjugué sur des cellules mononucléées du sang périphérique humain (PBMC) ou des lignées cellulaires exprimant le CD59 pour déterminer la concentration de coloration optimale.
• Le CD59 est ancré par GPI ; évitez les traitements susceptibles de libérer les protéines ancrées par GPI (par exemple la phospholipase C), sauf si vous évaluez spécifiquement la dépendance à l'ancre. Validez le système d'échantillon concerné.
• La réactivité croisée n'est rapportée que pour l'homme ; si vous travaillez avec des modèles non humains, validez la spécificité et la réactivité avant utilisation.

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