Anticorps monoclonal de lapin anti-HSPA4 pour WB, IHC-P, ELISA - P34932

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de HSPA4

• HSPA4 (protéine de choc thermique 70 kDa 4) est également connue sous les noms HSP70RY, APG-2 et membre 2 de la famille des protéines de choc thermique H. Elle est codée par le gène HSPA4 (également appelé APG2 ou HSPH2) sur le chromosome 5 humain.
• En tant que membre de la famille Hsp70, HSPA4 possède un domaine ATPase hautement conservé et un domaine de liaison au substrat, lui permettant de fonctionner comme une chaperonne moléculaire dépendante de l'ATP impliquée dans le repliement des protéines et la réponse au stress.
• La protéine contient des motifs de liaison aux nucléotides, cohérents avec sa capacité à lier l'ATP, ce qui est essentiel pour son cycle chaperon et son interaction avec les co-chaperonnes.
• Les études de localisation subcellulaire indiquent que HSPA4 est principalement cytoplasmique, où elle exerce ses fonctions chaperonnes dans des conditions normales et de stress.
• Les modifications post-traductionnelles de HSPA4 incluent l'acétylation, la phosphorylation et la méthylation, qui peuvent réguler son activité, sa stabilité ou ses interactions protéine-protéine.
• L'épissage alternatif du transcrit HSPA4 donne naissance à plusieurs isoformes, élargissant potentiellement sa diversité fonctionnelle dans différents contextes cellulaires.
• HSPA4 est classée comme une protéine de réponse au stress, et son expression est probablement régulée à la hausse dans des conditions de stress cellulaire pour prévenir l'agrégation des protéines et maintenir l'homéostasie protéique (protéostasie).

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène utilisé pour cet anticorps est un peptide synthétique couvrant les acides aminés 700–800 de la protéine HSPA4 humaine (P34932). Cette région se situe dans le domaine C-terminal, qui est moins conservé parmi les membres de la famille Hsp70 et peut conférer une spécificité à la cible.
• Pour les applications de Western blot (WB), envisagez d'utiliser un protocole SDS-PAGE dénaturant standard avec un étalon de poids moléculaire couvrant la plage des 94 kDa. Optimisez les conditions de transfert pour les protéines de haut poids moléculaire et validez la détection avec des contrôles positifs appropriés (par exemple, des lysats de cellules HeLa ou HEK293).
• En immunohistochimie (IHC-P), les méthodes de démasquage antigénique (par exemple, démasquage thermique à pH 6 ou 9) et les dilutions d'anticorps doivent être optimisées empiriquement pour chaque type de tissu afin de réduire le bruit de fond et d'obtenir une coloration spécifique.
• Pour l'ELISA, assurez-vous que la paire antigène de capture / anticorps de détection a été rigoureusement testée et effectuez des titrages en damier pour établir les concentrations de travail optimales.
• Comme cet anticorps est produit contre un immunogène peptidique, il peut reconnaître des épitopes linéaires exposés dans des conditions dénaturantes (par exemple, WB) mais peut nécessiter une validation dans des tests de conformation native.

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