Anticorps polyclonal anti-HSD3B1 pour WB, IF-P, ELISA - P14060

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de HSD3B1

• HSD3B1 est une enzyme bifonctionnelle appartenant à la famille des 3-béta hydroxystéroïde déshydrogénase/isomérase. Elle catalyse l'oxydation et l'isomérisation des précurseurs 3β-hydroxy-Δ5-stéroïdes en 3-oxo-Δ4-stéroïdes, une étape essentielle de la biosynthèse de toutes les principales hormones stéroïdiennes. Cela inclut la conversion de la prégnénolone en progestérone, du 17α-hydroxyprégnénolone en 17α-hydroxyprogestérone, de la déhydroépiandrostérone (DHEA) en 4-androstènedione, et de l'androstènediol en testostérone. Références associées : PMID:1401999 PMID:2139411
• Au-delà de la stéroïdogenèse de novo, HSD3B1 régule la biodisponibilité locale des androgènes en interconvertissant les androgènes 5α-réduits actifs et inactifs. Elle inactive efficacement la dihydrotestostérone (DHT) en la convertissant en 5α-androstanediol, un métabolite qui ne se lie pas au récepteur des androgènes. Références associées : PMID:1401999 PMID:2139411
• HSD3B1 est ancrée aux membranes intracellulaires par une hélice transmembranaire monocaudale et se localise à la fois sur la membrane du réticulum endoplasmique et la membrane mitochondriale.
• L'enzyme est principalement exprimée dans le placenta et la peau, et se trouve également à des niveaux significatifs dans le tissu glandulaire mammaire.
• Elle est classée selon plusieurs mots-clés fonctionnels, notamment enzyme multifonctionnelle, oxidoréductase dépendante du NAD/NADP, isomérase, métabolisme des stéroïdes et métabolisme lipidique, ce qui souligne son rôle central dans les voies stéroïdogènes et métaboliques.
• Selon UniProt, on estime que HSD3B1 utilise le NAD+ comme donneur d'électrons préféré pour son activité déshydrogénase et le NADPH pour son activité réductase.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène correspond à la protéine HSD3B1 humaine de longueur complète (acides aminés 1-290), ce qui peut générer une réponse polyclonale ciblant de multiples épitopes. Pour le Western blot, utilisez des lysats de contrôle positif issus de tissu placentaire ou mammaire, ou de lignées cellulaires exprimant fortement HSD3B1 endogène (par exemple, cellules de cancer du sein ou de la prostate).
• Le poids moléculaire prédit est d'environ 42 kDa. Compte tenu de sa localisation membranaire, assurez une solubilisation suffisante en utilisant des tampons de lyse appropriés contenant des détergents (par exemple, tampon RIPA) et évitez de faire bouillir les échantillons à des températures excessivement élevées pour prévenir l'agrégation.
• Pour l'immunofluorescence (IF-P), incluez une étape de perméabilisation (par exemple, 0,1 % Triton X-100) pour permettre à l'anticorps d'accéder aux compartiments membranaires intracellulaires. Une co-coloration avec des marqueurs du RE ou des mitochondries peut valider la localisation subcellulaire attendue.
• L'anticorps a une réactivité croisée confirmée avec des échantillons humains, de souris et de rat. Vérifiez son adéquation pour d'autres espèces en contrôlant l'homologie de séquence et en réalisant une expérience pilote.
• En tant qu'anticorps polyclonal, la cohérence entre lots peut varier. Envisagez un stockage par aliquotes et un test par gradient lors de l'optimisation pour de nouveaux tests, et validez les performances dans votre propre système d'échantillons.

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