Anticorps monoclonal de lapin anti-HPRT1 pour WB et ELISA - P00492

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de HPRT1

• L'hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransférase (HPRT1) catalyse la conversion de l'hypoxanthine en IMP et de la guanine en GMP via la voie de sauvetage des purines, recyclant les bases puriques en nucléotides.
• HPRT1 transfère le groupe 5-phosphoribosyl du 5-phosphoribosylpyrophosphate (PRPP) vers les bases puriques, jouant un rôle central dans la production de nucléotides puriques pour la synthèse des acides nucléiques et l'énergétique cellulaire.
• HPRT1 est un membre de la famille des purine/pyrimidine phosphoribosyltransférases, conservée au fil des espèces, et est codée par le gène HPRT1 (HGPRT) situé sur le chromosome X.
• Au niveau sous-cellulaire, HPRT1 est principalement localisée dans le cytoplasme, où elle accède à ses substrats pour les réactions de sauvetage.
• Les modifications post-traductionnelles comprennent l'acétylation, la phosphorylation et la formation de liaisons isopeptidiques (ubiquitination), qui peuvent réguler son activité ou sa stabilité.
• Les mutations du gène HPRT1 causent le syndrome de Lesch-Nyhan, une pathologie neurologique grave, et sont associées à la goutte due à la surproduction de purines résultant d'un défaut de sauvetage.
• L'enzyme nécessite du magnésium comme cofacteur et se lie aux nucléotides, ce qui reflète son rôle dans le transfert du phosphoribosyle.

Conseils expérimentaux et techniques

• La conception de l'immunogène basée sur la région centrale de HPRT1 (acides aminés 119-218) peut fournir une spécificité pour la cible tout en évitant la variabilité N-terminale ou C-terminale. Envisagez des tests sur les espèces concernées (humain, souris, rat) en raison de la forte conservation de la séquence.
• Pour le Western blot, la bande attendue est d'environ 25 kDa ; utilisez des marqueurs de poids moléculaire appropriés. Si une validation par knock-out est requise, incluez des lysats cellulaires HPRT1 KO pour confirmer la spécificité.
• En ELISA, un dosage indirect standard peut être utilisé avec le peptide ou la protéine recombinante HPRT1 ; pensez à optimiser les conditions de revêtement et la dilution de l'anticorps.
• HPRT1 étant ubiquitaire, confirmez son expression dans votre type d'échantillon ; il peut servir de témoin de chargement dans certaines expériences.
• La réactivité croisée avec les HPRT1 de souris et de rat permet des recherches translationnelles ; validez-la dans le système modèle souhaité.

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