Anticorps monoclonal de lapin anti-HLA-DR pour WB, IF/ICC, ELISA - P01903

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de HLA-DR

• Le gène HLA-DRA code la chaîne alpha de l’antigène d’histocompatibilité HLA de classe II DR, qui s’associe à la chaîne bêta (HLA-DRB) pour former la molécule fonctionnelle du CMH de classe II à la surface des cellules présentatrices d’antigène.
• Le complexe CMH II présente des peptides antigéniques extracellulaires (généralement de 10 à 30 acides aminés) aux cellules T CD4 positives, orientant les fonctions effectrices des lymphocytes T auxiliaires qui stimulent l’immunité médiée par les anticorps et l’activation des macrophages.
  Références associées :
  PMID:15265931, PMID:15322540, PMID:17334368
• Dans le microenvironnement tumoral, HLA-DR présente des peptides dérivés de cellules tumorales apoptotiques phagocytées ou de protéines tumorales sécrétées internalisées par macropinocytose, ce qui l’implique dans la surveillance immunitaire du cancer.
  Références associées :
  PMID:31495665
• HLA-DR présente également des peptides provenant des autolysosomes après macroautophagie, un processus essentiel à la sélection des lymphocytes T thymiques et à la tolérance immunitaire centrale.
  Références associées :
  PMID:17182262, PMID:23783831
• La sélection des épitopes immunodominants par le CMH II suit deux voies de traitement distinctes : « lier d’abord, couper/élaguer ensuite » pour les peptides dérivés d’agents pathogènes et « couper d’abord, lier ensuite » pour les peptides du soi.
  Références associées :
  PMID:25413013
• La présence d’un gros résidu d’ancrage hydrophobe en position 1 du peptide est essentielle à une interaction de haute affinité avec le sillon de liaison du CMH II.
  Références associées :
  PMID:8145819
• Au niveau subcellulaire, HLA-DR se trouve sur la membrane cellulaire, mais transite également par le réticulum endoplasmique et les compartiments endosomaux/lysosomaux, notamment les endosomes précoces et tardifs, les lysosomes et les autolysosomes.
• Il est principalement exprimé dans les cellules présentatrices d’antigène professionnelles — macrophages, cellules dendritiques et lymphocytes B — ainsi que dans les cellules épithéliales thymiques, où il intervient dans l’éducation des lymphocytes T.
  Références associées :
  PMID:15322540, PMID:23783831, PMID:31495665
• Ses principales caractéristiques structurales comprennent un peptide signal, une hélice transmembranaire unique, des ponts disulfure et une glycosylation liée à l’azote ; il est également soumis à une ubiquitination.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L’immunogène recombinant couvre les acides aminés 26 à 126 de HLA-DRA humain, incluant le domaine extracellulaire N-terminal ; cette région est moins polymorphe que la chaîne bêta et peut conférer une large réactivité vis-à-vis des allèles HLA-DR, mais une validation dans le système cellulaire cible est recommandée.
• Pour le western blot, une bande d’environ 29 kDa est attendue dans des conditions réductrices ; il est recommandé d’utiliser comme contrôles positifs des lignées cellulaires humaines dérivées de cellules présentatrices d’antigène (par exemple Raji, THP-1 différenciées) ou des tissus présentant une forte expression du CMH II.
• En immunofluorescence/ICC, les protocoles de fixation et de perméabilisation doivent être optimisés, car la cible est localisée sur la membrane et peut également être détectée dans les compartiments intracellulaires (endosomes/lysosomes). Un double marquage avec un marqueur membranaire est conseillé.
• Pour l’ELISA, l’anticorps peut convenir comme réactif de capture ou de détection de HLA-DR soluble ou de complexes peptide–CMH ; les conditions du test doivent être ajustées par titrage afin d’établir la linéarité et la spécificité.
• Notez que la réactivité croisée est rapportée uniquement chez l’humain ; la réactivité croisée avec d’autres espèces n’est pas garantie. Lors de l’adaptation à des échantillons de primates non humains, l’homologie de séquence doit être vérifiée.

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