Anticorps monoclonal anti-HLA-DR pour WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - P01903

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de la chaîne alpha de HLA-DR

• HLA-DRA (également connu sous le nom de HLA-DRA1) est un gène situé sur le chromosome 6 qui code la chaîne alpha des molécules du CMH de classe II, avec un poids moléculaire prédit d’environ 29 kDa (environ 26 kDa sous sa forme mature après clivage du peptide signal).
• La chaîne alpha codée s’assemble avec la chaîne bêta HLA-DRB pour former des hétérodimères HLA-DR fonctionnels qui présentent des peptides antigéniques aux lymphocytes T CD4 positifs, orientant les fonctions effectrices des lymphocytes T auxiliaires et l’activation des macrophages (PubMed:15265931, PubMed:15322540, PubMed:17334368). Références associées : PMID:15265931 PMID:15322540 PMID:17334368
• Le chargement des antigènes peptidiques suit deux modes de traitement distincts : « liaison d’abord, découpage/élagage ensuite » pour les peptides dérivés d’agents pathogènes et « découpage d’abord, liaison ensuite » pour les peptides du soi, le résidu d’ancrage N-terminal (généralement un acide aminé hydrophobe de grande taille) étant essentiel à la liaison au CMH II (PubMed:25413013, PubMed:8145819). Références associées : PMID:25413013 PMID:8145819
• Dans le microenvironnement tumoral, HLA-DR présente des antigènes dérivés de la tumeur capturés par les CPA via la phagocytose ou la macropinocytose, facilitant les réponses antitumorales des lymphocytes T CD4+ (PubMed:31495665). Références associées : PMID:31495665
• Le complexe HLA-DR circule dans les compartiments endosomaux et lysosomaux, notamment les autolysosomes, où il présente des peptides issus de protéines intracellulaires dérivées de l’autophagie, un mécanisme essentiel à la sélection des lymphocytes T thymiques et à la tolérance centrale (PubMed:17182262, PubMed:23783831). Références associées : PMID:17182262 PMID:23783831
• HLA-DRA est exprimé au niveau protéique dans les cellules professionnelles présentatrices d’antigènes — macrophages, cellules dendritiques et lymphocytes B — ainsi que dans les cellules épithéliales thymiques, ce qui concorde avec son rôle dans l’immunité adaptative (PubMed:15322540, PubMed:23783831, PubMed:31495665). Références associées : PMID:15322540 PMID:23783831 PMID:31495665
• HLA-DRA est une glycoprotéine transmembranaire présentant des ponts disulfure et une ubiquitination potentielle (liaison isopeptidique), ce qui peut influencer sa stabilité et son acheminement lors de la formation de la synapse immunologique.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• Conception de l’immunogène : l’anticorps a été produit contre un peptide situé entre les acides aminés 100 et 200 de HLA-DRA humain, et devrait reconnaître l’ectodomaine mature ; la réactivité croisée avec d’autres espèces n’est pas garantie, mais peut être testée si nécessaire.
• Western blot (WB) : utiliser des conditions réductrices et faire migrer un marqueur de poids moléculaire ; la bande détectée devrait apparaître à environ 29 kDa. Inclure comme contrôle positif un lysat de lignées cellulaires B humaines (par exemple Raji) ou de PBMC.
• Immunofluorescence (IF/ICC) : perméabiliser les cellules avec 0,1 % de Triton X-100 afin de permettre à l’anticorps d’accéder aux épitopes intracellulaires ; HLA-DR se localise principalement à la surface cellulaire et dans les compartiments endocytiques. Utiliser des CPA humaines ou des lignées cellulaires exprimant HLA-DR comme contrôles positifs.
• Immunohistochimie sur paraffine (IHC-P) : effectuer une récupération antigénique induite par la chaleur dans un tampon citrate (pH 6,0) avant l’incubation ; valider la coloration sur des tissus lymphoïdes humains (amygdale, rate) connus pour exprimer le CMH II.
• ELISA : l’anticorps peut être utilisé dans un format ELISA sandwich avec un anticorps de détection apparié ; valider le test à l’aide d’une protéine HLA-DR recombinante ou de plaques recouvertes de peptide.

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