Anticorps monoclonal de lapin anti-HLA-DPB1 pour WB, IF-P, IHC-P, ELISA - P04440

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de HLA-DPB1

• HLA-DPB1 est la chaîne bêta de l'antigène d'histocompatibilité de classe II du HLA, une glycoprotéine transmembranaire hétérodimère qui joue un rôle central dans la réponse immunitaire adaptative en présentant des antigènes peptidiques exogènes aux lymphocytes T CD4+. Les peptides traités, d'une longueur typique de 10 à 30 résidus, sont chargés sur les molécules du CMH de classe II au sein du système endosomal/lysosomique.
• La molécule fonctionnelle du CMH de classe II est assemblée sous forme d'hétérononamère constitué de trois hétérodimères alpha-bêta associés à un trimère de chaîne invariante (CD74). Après entrée dans la voie endosomique, CD74 est progressivement clivé par des protéases telles que la cathepsine S (CTSS) et la cathepsine L (CTSL), laissant un peptide résiduel CLIP dans la groove de liaison, qui est ensuite échangé contre des peptides antigéniques de haute affinité avec l'aide de l'éditeur de peptides HLA-DM.
• Le processus de chargement de l'antigène se déroule dans un compartiment endosomal/lysosomique tardif spécialisé, où le microenvironnement acide facilite à la fois la protéolyse des antigènes internalisés et la réaction d'échange de peptides. Dans les lymphocytes B, ce processus est en outre modulé par HLA-DO, qui régule l'activité de HLA-DM.
• HLA-DPB1 est un membre de la famille des gènes de la chaîne bêta du CMH de classe II et est localisé au locus HLA-DP sur le chromosome 6. Les noms alternatifs sont DPB1, HLA-DP, HLA-DPB et HLA-DP1B.
• Au niveau sous-cellulaire, HLA-DPB1 transite par le réticulum endoplasmique et l'appareil de Golgi avant d'atteindre la surface cellulaire. Il est également détecté dans les endosomes, les lysosomes et le réseau trans-Golgien, ce qui reflète son itinéraire intracellulaire dynamique pendant le chargement des peptides et l'expression de surface.
• La protéine est classée comme une glycoprotéine transmembranaire avec un peptide signal, une seule hélice transmembranaire et des ponts disulfures. Elle subit une glycosylation N-liée et appartient à la superfamille des immunoglobulines.
• Les molécules du CMH de classe II, dont HLA-DPB1, sont exprimées de manière constitutive sur les cellules professionnelles présentant l'antigène telles que les cellules dendritiques, les lymphocytes B et les macrophages, mais peuvent également être induites sur d'autres types cellulaires, y compris les cellules épithéliales intestinales, où elles participent à l'immunité muqueuse.

Conseils expérimentaux et techniques

• L'immunogène utilisé pour générer cet anticorps est un peptide synthétique couvrant les résidus 1–100 de HLA-DPB1 humain, correspondant à la région extracellulaire N-terminale. Cette région inclut le peptide signal et une partie du domaine β1, qui est impliqué dans la liaison du peptide et la formation de l'hétérodimère du CMH II. Envisagez de valider l'accessibilité de l'épitope dans des conditions natives par rapport à des conditions dénaturantes pour votre application spécifique.
• Pour le Western blot, une bande migrant à environ 29 kDa est attendue dans des conditions réductrices. En raison de la glycosylation et de la formation de complexes protéiques, des espèces de poids moléculaire plus élevé peuvent également être observées. Optimisez les conditions de blocage et de lavage pour minimiser la liaison non spécifique dans les lysats complexes.
• En immunofluorescence (IF-P) et en immunohistochimie (IHC-P), l'anticorps cible un antigène associé à la membrane. Le récupération d'antigène par tampon citrate chauffé (pH 6.0) est souvent bénéfique pour les coupes fixées au formol et incluses en paraffine. Incluez des contrôles d'isotype appropriés et des contrôles positifs spécifiques du tissu, tels que les amygdales ou les ganglions lymphatiques, où HLA-DPB1 est fortement exprimé.
• Cet anticorps présente une réactivité croisée avec la souris et le rat, ce qui indique la reconnaissance d'un épitope conservé. Lors de l'utilisation d'échantillons de rongeurs, tenez compte des différences potentielles dans la distribution des types cellulaires du CMH de classe II et les niveaux d'expression. Des expériences pilotes sont recommandées pour confirmer l'adéquation à votre système modèle.
• Pour les applications ELISA, l'anticorps peut être utilisé comme réactif de capture ou de détection contre HLA-DPB1 recombinant ou natif. L'association avec un anticorps anti-chaîne alpha de HLA-DP peut aider à garantir la détection de l'hétérodimère intact. Validez le test dans la matrice d'échantillon appropriée pour exclure toute interférence du HLA soluble ou des molécules du CMH de classe I réactives croisées.

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