Anticorps monoclonal de lapin anti-histone H3.3 pour WB, IHC-P, ELISA, ChIP, ChIP-seq - P84243

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'Histone H3.3

• Histone variante qui remplace l'histone H3 conventionnelle dans les nucléosomes au niveau des gènes activement transcrits, constituant la forme majoritaire de H3 dans les cellules non divisantes et s'incorporant indépendamment de la synthèse d'ADN
• Composant central des nucléosomes, il enroule et compacte l'ADN en chromatine pour limiter l'accessibilité de la matrice ; il joue donc un rôle central dans la régulation de la transcription, la réparation de l'ADN, la réplication de l'ADN et la stabilité chromosomique
• Il est soumis à un ensemble complexe de modifications post-traductionnelles (acétylations, méthylations, phosphorylations, etc.) qui constituent le code histone, régulant la dynamique de la chromatine et l'expression génique
• Il est localisé exclusivement dans le noyau et sur les chromosomes, enrichi au niveau des régions de déplacement nucléosomique dans tout le corps des gènes, marquant la chromatine transcriptionnellement active
• Il est codé par deux gènes, H3-3A (H3F3A) et H3-3B (H3F3B), qui produisent des protéines identiques ; il est distinct des variants canoniques de H3 dépendants de la réplication
• Des variants pathogènes sont associés à des déficits intellectuels et des troubles du développement, soulignant son rôle épigénétique essentiel
• Il est très conservé chez les vertébrés, avec un poids moléculaire prédit d'environ 15 328 Da, bien qu'on l'observe souvent migrer autour de 15–17 kDa en SDS-PAGE en raison des modifications post-traductionnelles

Conseils expérimentaux et techniques

• L'immunogène couvre les acides aminés 57 à 136 de l'Histone H3.3 humaine, une région impliquée dans les interactions nucléosomiques ; cet épitope peut être conformationnellement sensible : il est recommandé de tester dans des conditions natives et dénaturantes.
• Pour le WB, une bande d'environ 15 kDa est attendue ; validez dans votre système d'échantillon spécifique et utilisez des contrôles de charge appropriés (par exemple, H3 totale ou protéines ménagères).
• Compte tenu de la réactivité croisée rapportée avec l'homme, la souris, le rat et une large gamme d'autres espèces, un test préliminaire dans des modèles non standards est recommandé.
• Pour ChIP et ChIP-seq, optimisez les conditions de réticulation et de cisaillement ; les performances de l'anticorps doivent être vérifiées avec des régions contrôles positives (gène actif) et négatives (locus silencieux).
• Pour IHC-P, la récupération d'antigène et la dilution de l'anticorps doivent être déterminées empiriquement ; un profil de coloration nucléaire est attendu.

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