Anticorps polyclonal de lapin anti-HIF1AN/FIH1 pour WB et ELISA - Q9NWT6

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de HIF1AN/FIH1

• HIF1AN (inhibiteur du facteur inductible par l'hypoxie 1-alpha), également appelé facteur inhibiteur de HIF-1 (FIH-1), est une asparagine hydroxylase qui régule la réponse à l'hypoxie.
• En normoxie, il hydroxyle HIF-1α au niveau de l'Asn-803 dans le domaine de transactivation C-terminal, bloquant le recrutement des coactivateurs p300/CBP et réprimant ainsi la transcription des gènes inductibles par l'hypoxie.
• Agit comme un capteur d'oxygène direct ; son activité hydroxylase nécessite de l'oxygène moléculaire, du fer et du 2-oxoglutarate, reliant la tension en oxygène cellulaire à la stabilité et à l'activité de HIF-1α.
• Au-delà de HIF-1α, HIF1AN hydroxyle les résidus asparagine, aspartate et histidine dans les domaines de répétition d'ankyrine (ARD) de diverses protéines, notamment NFKB1, NOTCH1, ASB4 et TNKS2, modulant les voies de signalisation au-delà de l'hypoxie.
• Régule négativement la signalisation Notch en hydroxylant NOTCH1, ce qui accélère la différenciation myogénique ; inversement, l'hydroxylation d'ASB4 favorise positivement la différenciation vasculaire.
• La distribution subcellulaire comprend à la fois le noyau et le cytoplasme, avec une accumulation périnucléaire, reflétant ses rôles dans la régulation transcriptionnelle et les interactions protéiques cytoplasmiques.
• Classé comme une dioxygénase et une oxydoréductase dépendante du fer ; son site actif contient un centre ferreux mononucléaire essentiel à la catalyse.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène couvre pratiquement toute la protéine HIF1AN (résidus 1–349), ce qui englobe le domaine catalytique JmjC ; cette conception est censée générer des anticorps reconnaissant de multiples épitopes, facilitant la détection dans les essais dénaturants et natifs.
• Pour le Western blot, une bande autour de 40–41 kDa est attendue ; l'inclusion d'un lysat cellulaire normoxique (par exemple, HeLa, HEK293) comme témoin positif et d'un échantillon traité par l'hypoxie pour évaluer les effets dépendants de l'hydroxylation de HIF-1α peut être informative.
• Lors de la réalisation d'un ELISA, envisagez un revêtement avec du HIF1AN recombinant ou un peptide HIF-1α ; un ELISA en sandwich associé à un anticorps de capture spécifique d'un épitope distinct pourrait augmenter la spécificité.
• La réactivité croisée prédite avec HIF1AN de souris est confirmée, mais les performances doivent être vérifiées en utilisant les extraits de tissus ou de cellules appropriés.
• Les dilutions d'anticorps et les conditions d'essai optimales doivent être déterminées empiriquement pour chaque système expérimental.

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