Anticorps Monoclonal Lapin Anti-HIF1α pour WB, IF/ICC, ICC - Q16665

Spécifications et Paramètres Principaux du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation du HIF1α

• HIF1α est un régulateur transcriptionnel majeur de la réponse adaptative à l'hypoxie, activant plus de 40 gènes impliqués dans l'apport d'oxygène et l'adaptation métabolique (érythropoïétine, VEGF, enzymes glycolytiques, etc.). Références connexes : PMID:11292861, PMID:11566883, PMID:15465032
• Il forme un hétérodimère avec ARNT et se lie aux éléments de réponse à l'hypoxie (HRE) contenant la séquence centrale 5'-TACGTG-3' dans les promoteurs des gènes cibles. L'activation transcriptionnelle nécessite le recrutement de coactivateurs tels que CREBBP et EP300, et est renforcée par NCOA1/NCOA2 et APEX1. Références connexes : PMID:16543236, PMID:9887100, PMID:10594042, PMID:10202154
• En plus de ses rôles hypoxiques canoniques, HIF1α participe à la distribution axonale des mitochondries dans les neurones pendant l'hypoxie. Références connexes : PMID:19528298
• Lors de l'infection par le SARS-CoV-2, HIF1α est nécessaire pour l'induction de la glycolyse et de l'état pro-inflammatoire dans les monocytes, améliorant la réplication virale et l'expression des cytokines (IL1B, TNF, IL6, interférons). Références connexes : PMID:32697943
• HIF1α est exprimé de manière ubiquitaire avec les niveaux les plus élevés dans le rein et le cœur ; il est souvent surexprimé dans les cancers en raison de l'hypoxie intratumorale ou de mutations oncogéniques, et montre une expression élevée dans les tumeurs hypophysaires par rapport au tissu hypophysaire normal.
• La protéine se localise dans le cytoplasme, le noyau et les speckles nucléaires, reflétant son transport dynamique et son activité transcriptionnelle.
• Les modifications post-traductionnelles comprennent l'hydroxylation, l'acétylation, la phosphorylation, la S-nitrosylation et l'ubiquitination, qui régulent la stabilité de la protéine et l'activité transcriptionnelle.

Guidance Expérimentale et Conseils Techniques

• L'anticorps a été élevé contre un peptide synthétique et est censé reconnaître la protéine HIF1α totale chez les espèces humaine et murine. Confirmez la réactivité dans votre modèle expérimental spécifique.
• Pour le Western blot, prévoyez des bandes à environ 83, 93 ou 96 kDa en fonction de l'expression des isoformes et des modifications post-traductionnelles ; utilisez des marqueurs de poids moléculaire appropriés et des témoins positifs traités par hypoxie pour vérifier la détection.
• En immunofluorescence/ICC, optimisez la fixation et la perméabilisation pour préserver à la fois les signaux de localisation cytoplasmique et nucléaire ; l'induction de la stabilisation de HIF1α par des mimétiques de l'hypoxie ou une incubation en faible oxygène est recommandée avant la coloration.
• Pour les applications ELISA, validez la paire d'anticorps avec du HIF1α recombinant ou des lysats cellulaires traités par hypoxie pour assurer une plage de détection linéaire et la sensibilité.
• Puisque HIF1α est rapidement dégradé en normoxie, prétraitez les cellules avec des inhibiteurs du protéasome (par exemple, MG132) ou exposez-les à l'hypoxie pour accumuler suffisamment de protéine cible pour une détection robuste dans toutes les applications.

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