Anticorps monoclonal anti-HIBADH pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P31937

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la HIBADH

• La HIBADH (3-hydroxyisobutyrate déshydrogénase) est une enzyme mitochondriale appartenant à la famille des oxydoréductases, utilisant le NAD comme cofacteur.
• Elle joue un rôle clé dans le catabolisme des acides aminés à chaîne ramifiée (valine, leucine, isoleucine), spécifiquement dans la conversion du 3-hydroxyisobutyrate en semi-aldéhyde méthylmalonique.
• La protéine est localisée dans la mitochondrie, comme l'indique son peptide de transit mitochondrial, qui est clivé pour donner l'enzyme mature.
• Les modifications post-traductionnelles incluent l'acétylation, qui peut réguler son activité enzymatique ou sa stabilité.
• L'expression de la HIBADH a été détectée dans les fibroblastes cutanés ; son expression dans d'autres tissus peut être déduite de son rôle métabolique.
• Des études structurales ont fourni une structure 3D de la HIBADH, aidant à comprendre son mécanisme catalytique et la reconnaissance du substrat.
• La protéine a été identifiée par séquençage direct des protéines et par des approches protéomiques, confirmant sa présence dans les mitochondries humaines.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond aux acides aminés 37-336 de la HIBADH humaine (NP_689953.1), ce qui exclut le peptide de transit mitochondrial prédit (environ les 36 premiers acides aminés) ; l'anticorps est donc susceptible de reconnaître la forme mitochondriale mature.
• Pour le Western blot (WB), une bande à environ 35 kDa est attendue (cohérent avec le poids moléculaire UniProt de 35,3 kDa). Confirmez la spécificité en utilisant des contrôles positifs et négatifs appropriés (par exemple, des cellules ou tissus surexprimant la HIBADH).
• En immunohistochimie (IHC-P) et en immunofluorescence (IF/ICC), des motifs de coloration mitochondriale doivent être observés. La co-localisation avec des marqueurs mitochondriaux peut aider à valider la spécificité.
• L'anticorps présente une réactivité croisée avec la HIBADH humaine, de souris et de rat ; lors de l'utilisation d'échantillons de rongeurs, vérifiez l'homologie de séquence dans la région de l'immunogène pour garantir une réactivité comparable.
• Pour les applications ELISA, envisagez d'utiliser l'immunogène recombinant comme contrôle positif et titrez la concentration d'anticorps pour un rapport signal sur bruit optimal.
• Pour minimiser la liaison non spécifique, des tampons de blocage appropriés (par exemple, lait écrémé à 5 % ou BSA) et une optimisation de la dilution sont recommandés.

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