Anticorps monoclonal anti-HFE pour WB, ELISA - Q30201

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'HFE

• L'HFE (protéine de l'hémochromatose héréditaire), également appelé HLA-H, est une protéine membranaire qui se lie au récepteur de la transferrine (TFR) et réduit son affinité pour la transferrine chargée de fer, régulant ainsi l'absorption du fer.
• Le gène codant pour l'HFE appartient à la famille du CMH de classe I ; des mutations de l'HFE sont associées à l'hémochromatose héréditaire, une maladie de surcharge en fer, ce qui confirme sa classification comme protéine variant pathologique.
• D'après UniProt, l'HFE est exprimé dans tous les tissus testés à l'exception du cerveau, indiquant une distribution large mais pas ubiquitaire.
• Au niveau sous-cellulaire, l'HFE se localise à la membrane cellulaire, où il interagit avec le TFR et d'autres protéines liées au fer pour contrôler l'homéostasie systémique du fer.
• L'épissage alternatif de l'HFE produit plusieurs isoformes, qui peuvent avoir des distributions tissulaires et des rôles fonctionnels distincts ; la forme complète liée à la membrane est l'espèce majoritaire.
• Les modifications post-traductionnelles comprennent la glycosylation et la formation de ponts disulfures, qui sont essentielles pour un repliement correct et l'expression à la surface cellulaire.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond à un peptide synthétique couvrant les acides aminés 249 à 348 de l'HFE humain, une région qui inclut une partie du domaine extracellulaire, l'hélice transmembranaire et la queue cytoplasmique. Cette conception permet la détection des formes complètes et de certaines formes tronquées en Western blot dénaturant.
• Pour le Western blot, utilisez des lysats protéiques totaux de tissus exprimant l'HFE tels que le foie ou le placenta (à l'exception du cerveau, où l'HFE est absent). Optimisez les conditions de blocage et de dilution de l'anticorps pour votre type d'échantillon spécifique.
• Pour les applications ELISA, la performance de l'anticorps peut dépendre du format de test (direct, indirect ou sandwich). Validez le clone dans votre matrice d'échantillon cible et envisagez de l'associer à un anticorps de capture qui reconnaît un épitope distinct.
• L'HFE étant une protéine membranaire, assurez une solubilisation et une dénaturation appropriées lors de la préparation de l'échantillon pour exposer l'épitope, particulièrement lorsque l'immunogène est partiellement intracellulaire.
• La réactivité croisée est rapportée pour l'HFE humain ; pour une utilisation avec d'autres espèces, l'homologie de séquence doit être vérifiée.

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