Anticorps polyclonal de lapin anti-HDAC3 pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - O15379

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'HDAC3

• L'HDAC3 est une histone désacétylase de classe I qui catalyse la désacétylation des résidus de lysine sur les extrémités N-terminales des histones principales (H2A, H2B, H3, H4), entraînant une condensation de la structure de la chromatine et une répression transcriptionnelle épigénétique.
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• Elle fonctionne en tant que partie de complexes répresseurs multiprotéiques tels que N-Cor, et est recrutée par des facteurs de transcription comme BCL6 pour désacétyler H3K27 au niveau des éléments enhancers, antagonisant l'activité d'EP300.
  Références associées : PMID:23911289, PMID:22230954
• Au-delà des histones, l'HDAC3 désacétyle une gamme de substrats non histoniques, y compris RARA, STAT3, MAPK14 et MEF2D, affectant des voies allant de l'inflammation à la survie cellulaire.
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• L'HDAC3 agit également comme une protéine-désacylase de lysine, éliminant des modifications acyl non acétyliques telles que le crotonyle (décrotonylation), le lactyle (délactylation) et les groupes 2-hydroxyisobutyryl, avec des substrats comme MAPRE1/EB1 et NBN/NBS1.
  Références associées : PMID:28497810, PMID:29192674, PMID:34608293, PMID:38961290
• Dans l'horloge circadienne, l'HDAC3 a des rôles indépendants de la désacétylase : elle favorise l'ubiquitination de BMAL1 et stabilise les protéines CRY, régulant ainsi l'expression des gènes circadiens et le métabolisme lipidique hépatique.
• Au niveau subcellulaire, l'HDAC3 est principalement nucléaire et associée aux chromosomes, mais également détectée dans le cytoplasme, ce qui est cohérent avec ses rôles de navette.
• Large expression dans les tissus, l'HDAC3 est une phosphoprotéine avec un épissage alternatif et de multiples partenaires d'interaction, sous-tendant son implication dans divers processus biologiques.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène (aa 299–428) cible la région C-terminale de l'HDAC3 humaine, qui est conservée chez la souris et le rat (comme indiqué par les données de réactivité croisée) ; vérifiez la réactivité croisée dans votre système modèle spécifique.
• En Western blot, l'HDAC3 a un poids moléculaire prédit d'environ 49 kDa ; utilisez des standards protéiques appropriés et confirmez la spécificité de la bande par knockdown avec siRNA ou des lysats cellulaires KO si disponibles.
• Pour IHC-P, des méthodes de récupération d'antigène (par exemple, tampon citrate pH 6,0, induite par chaleur) peuvent être nécessaires ; testez une gamme de dilutions d'anticorps (par exemple, 1:50–1:200) sur des tissus témoins.
• Pour IF/ICC, fixez les cellules avec du PFA à 4 % et perméabilisez avec du Triton X-100 à 0,1 % ; une localisation nucléaire devrait être observée ; incluez des témoins avec anticorps secondaire seul.
• Pour ELISA, l'anticorps peut être utilisé dans des formats direct ou indirect ; titrez par rapport à la protéine HDAC3 recombinante pour déterminer les concentrations optimales d'enrobage et de détection.
• Stockez l'anticorps à -20°C en aliquotes ; évitez les cycles répétés de congélation-décongélation pour maintenir les performances.

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