Anticorps polyclonal anti-GUCY2D pour Western Blot et ELISA - Q02846

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de GUCY2D

• GUCY2D, également connue sous le nom de guanylate cyclase 1 rétinienne (ROS-GC, GC-E), est une enzyme liée à la membrane codée par le gène GUCY2D chez l'homme. Ses multiples alias associés à des maladies incluent LCA1, CORD6 et CSNB1I.
• GUCY2D catalyse la conversion du GTP en cGMP, un second messager clé dans les cellules photoréceptrices, en reconstituant les niveaux de cGMP épuisés lors de la phototransduction dans les bâtonnets et les cônes. Cette activité est critique pour la transduction du signal visuel (PubMed:15123990, PubMed:21928830, PubMed:26100624). Références connexes : PMID:15123990 PMID:21928830 PMID:26100624
• Des preuves suggèrent que GUCY2D pourrait également être impliquée dans le trafic des protéines associées à la membrane vers la membrane du segment externe des photorécepteurs (Par similitude).
• La protéine se localise principalement à la membrane du segment externe des photorécepteurs et à la membrane du réticulum endoplasmique, ce qui est cohérent avec son rôle dans la transduction sensorielle et le traitement des protéines.
• GUCY2D est une glycoprotéine contenant plusieurs hélices transmembranaires, un pont disulfure et un peptide signal, caractéristique de son intégration membranaire et de son traitement par la voie sécrétoire.
• Les mutations de GUCY2D sont associées à plusieurs dystrophies rétiniennes héréditaires, notamment l'amaurose congénitale de Leber (LCA1), la dystrophie cône-bâtonnet (CORD6) et la cécité nocturne congénitale stationnaire, soulignant son rôle essentiel dans la vision.

Conseils expérimentaux et techniques

• Conception de l'immunogène : L'immunogène protéique de fusion recombinante correspond à la région N-terminale (aa 52-350) de GUCY2D humaine, qui pourrait cibler le domaine extracellulaire/luminal. Cette conception rationnelle assure la spécificité de l'anticorps tout en évitant les régions transmembranaires très hydrophobes.
• Western Blot (WB) : Une bande autour de 120 kDa est attendue sur la base du poids moléculaire calculé d'environ 120 kDa. En raison de la glycosylation et d'autres modifications, la migration réelle peut varier. Utilisez des témoins appropriés et validez sur des échantillons rétiniens ou dérivés de photorécepteurs.
• ELISA : L'anticorps convient pour l'ELISA. Envisagez un format ELISA indirect et validez en utilisant la protéine recombinante ou des lysats cellulaires exprimant GUCY2D. La réactivité croisée avec les orthologues de souris et de rat peut être avantageuse pour les études translationnelles.
• Préparation des échantillons : Pour les protéines membranaires comme GUCY2D, assurez une solubilisation adéquate avec des détergents appropriés et évitez de faire bouillir les échantillons pour prévenir l'agrégation. Optimisez les conditions de dénaturation pour votre configuration expérimentale spécifique.

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