Anticorps monoclonal anti-GCLC pour WB, IF/ICC, ELISA - P48506

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de la GCLC

• La GCLC, également connue sous les noms de chaîne lourde de la GCS, gamma-ECS ou gamma-glutamylcystéine synthétase, est la sous-unité catalytique de la glutamate-cystéine ligase (GCL).
• Elle catalyse la ligation dépendante de l’ATP du L-glutamate et de la L-cystéine, première étape limitante de la biosynthèse du glutathion (GSH), une voie antioxydante essentielle.
• Avec la sous-unité régulatrice GCLM, la GCLC forme l’holoenzyme GCL hétérodimérique, essentielle au maintien de l’homéostasie rédox cellulaire.
• Les mots-clés indiquent que la GCLC est sujette à l’acétylation et à la phosphorylation, ce qui suggère une régulation par des modifications post-traductionnelles.
• Les mutations de la GCLC sont associées à une anémie hémolytique héréditaire due à une déficience en glutathion, soulignant sa pertinence clinique.
• La GCLC contient un domaine de liaison à l’ATP, ce qui est cohérent avec son rôle de ligase utilisant l’ATP pour la synthèse du glutathion.
• Elle fait partie du protéome de référence et a été identifiée dans plusieurs études de protéomique, confirmant son expression ubiquitaire.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L’immunogène couvre la région N-terminale (acides aminés 1-135) de la GCLC humaine, une région pouvant être conservée entre les espèces, ce qui est cohérent avec la réactivité croisée observée avec la souris.
• Pour le western blot (WB), envisagez d’optimiser la dilution de l’anticorps primaire et validez les résultats avec des lysats témoins positifs et négatifs exprimant la GCLC.
• En immunofluorescence / immunocyt chimie (IF/ICC), assurez-vous d’utiliser des méthodes de fixation et de perméabilisation adaptées à votre type cellulaire ; l’inclusion de témoins d’isotype est recommandée.
• Pour l’ELISA, testez l’anticorps avec de la GCLC recombinante ou une protéine native présente dans des lysats cellulaires/tissulaires ; une titration en damier peut aider à déterminer les concentrations optimales d’anticorps et d’antigène.
• Compte tenu de sa réactivité croisée avec la souris, cet anticorps peut convenir aux études translationnelles menées sur des modèles de rongeurs ; une validation dans l’espèce concernée est recommandée.
• Incluez toujours les témoins appropriés (par exemple, des échantillons knockout ou soumis à une extinction par siRNA) afin de confirmer la spécificité dans votre système expérimental.

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