Anticorps polyclonal de lapin anti-alpha-galactosidase (GLA) pour WB, IF/ICC, ELISA - P06280

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'alpha-galactosidase (GLA)

• L'alpha-galactosidase A (GLA), également connue sous le nom de mélibiase, est une glycosidase lysosomale qui catalyse l'hydrolyse des groupements alpha-galactosyles terminaux des glycoprotéines et des glycolipides.
• Son substrat principal dans le lysosome est le globotriaosylcéramide (Gb3), et son activité est critique pour la dégradation étape par étape des glycosphingolipides.
• L'enzyme est codée par le gène GLA ; les mutations entraînent l'accumulation de glycosphingolipides, une caractéristique des maladies de surcharge lysosomale.
• GLA est une glycoprotéine qui forme un homodimère ; le peptide mature a un poids moléculaire prédit d'environ 48,8 kDa, mais migre souvent autour de 49–51 kDa sur SDS-PAGE en raison de la glycosylation.
• La localisation subcellulaire est principalement lysosomale, ce qui est cohérent avec sa fonction dans le système endo-lysosomal.
• Les modifications post-traductionnelles comprennent la glycosylation N-liée et les ponts disulfure intramoléculaires, tous deux importants pour l'activité enzymatique et la stabilité.
• Selon UniProt, GLA est une protéine associée aux maladies avec de nombreuses variantes pathogènes signalées, et elle est sujette à l'édition de l'ARN.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène couvre les acides aminés 150 à 429, ce qui englobe une grande région conservée de l'enzyme ; par conséquent, l'anticorps peut être adapté pour détecter à la fois la protéine native et dénaturée.
• Pour le western blot (WB), une bande proche de 49–51 kDa est attendue, bien que la glycosylation et la préparation des échantillons puissent influencer la migration. Envisagez d'utiliser des témoins positifs tels que des lignées cellulaires humaines ou murines connues pour exprimer GLA.
• Pour l'immunofluorescence (IF/ICC), validez l'anticorps dans des cellules avec une expression modérée à élevée de GLA, et envisagez une co-coloration avec un marqueur lysosomal (par exemple, LAMP1) pour confirmer la localisation.
• L'anticorps réagit de manière croisée avec la GLA de souris, selon les données du fournisseur ; ainsi, des tissus murins tels que le foie, le rein ou le cœur peuvent servir de systèmes modèles.
• Les applications ELISA peuvent nécessiter une optimisation de l'antigène de revêtement et du format de détection ; l'utilisation de la protéine GLA recombinante comme standard peut aider à la quantification.

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